实验四、酪蛋白的制备

实验四、酪蛋白的制备

一、目的

1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、原理

牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 新鲜牛奶 （一）试剂

1、95%乙醇 1 200mL 2、无水乙醚 1 200mL 3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液 3000ml 先配A液与B液

A液：0.2mol/L醋酸钠溶液 称NaAC?3H2O 54.44g，定容至2000ml。

B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%----用冰醋酸也可以）24.0g定容至2000ml。

取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。 4、乙醇——乙醚混合液 乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） （二）器具

1、离心机 2、抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、 恒温水浴箱 5、烧杯

四、操作步骤

（一）酪蛋白的粗提

10mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。离心8-10分钟（3500-4000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化

1、用水洗涤沉淀 3次，离心5分钟（3500-4000 r /min），弃去上清液。

2、在沉淀中加入20mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。 含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%） 得率=﹝测得含量/理论含量﹞X100% 式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。 五、注意事项

1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。

2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。

3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。 六、实验报告

1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。 2、合理分析实验所得率 七、思考题

1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？

琼州学院实验项目卡

生物科学与技术学 院 生化 实验室 设日期___年__月__日

实验项目 酪蛋白的制备 1、还未开设的新实验 2、手段更新的实验 3、已开设过的实验 名 称 离心机 抽滤装置 恒温水浴箱 型号规格 1拖2 面向专业 课程1、必修 性质 2、选修 实验实验类型 本实验学时数量 2 1 1 数 4 分组 概况 名 称 型号规格 数量 （抽滤瓶、布氏漏斗） 所用主要仪器 烧杯 培养皿 电子天平 名 称 乙醇 乙醚 pH 4.7醋酸-2大6小 8 纯度级别 95% 无水 6 1 数量 名 称 纯度级别 数量 2000ml 2000ml 0.2 mol/L NaAC 500ml 所用主要药品 醋酸钠缓冲液 0.2 mol/L HAC 500ml 其他 滤纸、新鲜牛奶 实验情况记录 实验教师签名______________________ 实验员（管理员）签名______________