病毒学论文

原、发病机理及其免疫学特性,为以后禽流感研究及防控提供参考。

3、 症状

人感染禽流感之后的症状与禽类表现出的禽流感症状有所不同。据中国疾病预防控制中心国家流感中心研究员郭元吉介绍，人感染禽流感的症状与人流感症状极为相似，在临床识别上有相当的难度。患者潜伏期一般在7天以内，早期主要表现为发热、流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、全身不适，部分患者有恶心、腹痛、稀水样便等消化道症状，还有一些病人会并发眼结膜炎，患者的体温大多持续在39摄氏度以上。病情发展后，一些患者会出现单侧或双侧肺炎，少数患者伴有胸腔积液。少数患者病情可能恶化，发展成进行性肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、肾衰竭、败血症休克等多种并发症而死亡。

郭元吉说，由于人感染禽流感的病例已经出现并显现出很高的死亡率，近年国际上已将禽流感视为人类新出现的一种急性传染病，并列为国际反生物恐怖内容之一。到目前为止，被证实引发过人类禽流感病例的有H5N1、H7N7、H9N2亚型病毒。郭元吉认为，在高度警惕H5N1病毒的同时，也要注意来自H9N2亚型禽流感病毒株的威胁，这种病毒具有与人流感病毒相似的受体特异性，在人群中已经有一定的感染范围，但在禽类身上又多表现为不显性感染，不易被人觉察。

4、禽流感与人流感

很多专家指出，禽流感很可能是1918年西班牙流感的变种。或者，更确切地说，人类和鸟类的H1N1型病毒源自同一个祖先种。Jeffery K. Taubenberger等在对1918年在哺乳动物分离病毒的HA，NA，NP基因分析表明[4]：很可能早在1918年以前，就已经有一个祖先种感染过了哺乳动物。而且1918的西班牙流感病毒本身就是一个重组体[5]，它的HA蛋白的球形头部由部分猪流感病毒的基因编码，而柄由人类流感病毒的部分基因编码。

与H1亚型（226位亮氨酸和228丝氨酸）相比，高致病性禽流感的氨基酸残基是226位谷氨酸，228位甘氨酸，而1918的H1病毒保留了高致病性病毒的这些特点，因此，具有了禽流感A的抗原性，得以在人群中迅速传播。高致病性禽流感病毒的HA结构比起1997年的鸭H5HA病毒与1918年的病毒HA更具有相关性。

1957年亚洲流感的HA、NA和PB2基因来源于禽流感病毒；1968年香港流

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感HA、PB1来自禽流感病毒。可见，历史上三次流感大流行病毒来源都与禽流感病毒有关。

正常的禽类的病毒受体是a2-3唾液酸寡糖受体，人类的是a2-6唾液酸寡糖受体，突变实验表明；突变可使H2和H3的HA变成人类的受体，当插入在越南发现的病毒H5的HA中时，病毒可以与正常人的a2-6唾液酸寡糖受体结合，使人致病[11]。在对H1和H5亚型的病毒株特殊保守序列的突变实验中发现，个别的点突变可以使禽类的病毒产生对人的高特异性结合，这也暗示了一种可能的进化途径，即人类流感是从禽类演化而来的[6]。在H2（1957）和H3（1986）亚型中，一个226位Q—L的点突变增加了病毒对受体的结合能力；在H1（1918）亚型中，190位E—D，225位G—E也明显有增强结合的作用。

人类和禽类的流感并不容易相互传染，禽流感病毒之所以会侵入人体，可能是由于猪的过渡作用，因为两种流感都能在猪群中传播。一种可能的机制是，同时感染的病毒在猪体内发生重组，产生新的变种，这种变种同时具备了感染人类和禽类的特征结构。H Kida等估计了42株系（分别是H4到H13亚型）的禽流感病毒在猪体内的生长状况，这其中有27株没有人类的HA，结果表明，每种亚型至少有一个株系在猪的呼吸道中存活5到7天。说明即使不具备人类的HA，禽流感病毒也会传染到猪，这样，一些并不能在猪体内复制的病毒，由于共感染，部分基因也会在重组体中。

从WHO公布的时间表来看[7]，高致病性H5N1型禽流感病毒感染人类最早是1997年在香港发现的，距广东在鹅体内分离这种病毒（1996）仅相隔了一年。相关性分析表明，H5N1病毒的HA与鹅体内的毒株核苷酸同源性为98。8%，氨基酸同源性为98。9%，人的病毒株全是禽源[8]。这也可以从感染者身上得到验证，大多数感染者都有过与禽类接触的经历。

禽流感虽然可以传染给人类，在人与人之间传播确是温和的，受局限的。病毒在人群中只限于家庭成员之间扩散，至今为止，只有一例明显的孩子传染母亲的病例。97年香港发生的H5N1型禽流感并没有表现出通过人类之间接触而流行的情况，然而，最近，利用RT-PCR技术监测到病人之间的接触也可能产生一定的病症，一般在老年人中出现较多，可能是老年人的免疫比较弱的原因[9]。

5、 病变和诊断

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最急性死亡的病鸡常无眼观变化。急性者可见头部和颜面浮肿，鸡冠、肉髯肿大达３倍以上；皮下有黄色胶样浸润、出血，胸、腹部脂肪有紫红色出血斑；心包积水，心外膜有点状或条纹状坏死，心肌软化;病鸡腿部肌肉出血，有出血点或出血斑。消化道变化表现为腺胃乳头水肿、出血，肌胃角质层下出血，肌胃与腺胃交界处呈带状或环状出血；十二指肠、盲肠扁桃体、泄殖腔充血、出血；肝、脾、肾脏瘀血肿大，有白色小块坏死；呼吸道有大量炎性分泌物或黄白色干酪样坏死；胸腺萎缩，有程度不同的点、斑状出血；法氏囊萎缩或呈黄色水肿，有充血、出血；母鸡卵泡充血、出血，卵黄液变稀薄；严重者卵泡破裂，卵黄散落到腹腔中，形成卵黄性腹膜炎，腹腔中充满稀薄的卵黄。输卵管水肿、充血，内有浆液性、粘液性或干酪样物质。公鸡睾丸变性坏死。

6、禽流感的疫苗防控研究

第一：禽流感的防控 6.1 防控研究

流感的防控主要从疫苗防疫、药物预防、饲养管理等方面综合进行防治。流感病毒水平传播效率极高, 其致病力变异极为复杂, 并且对其机制迄今知之甚少, 故禽流感的弱毒疫苗自然成为可望而不可及的奢望。传统的灭活疫苗具有良好的免疫保护性, 是禽流感防制的主动措施、关键环节和最后防线, 在许多国家禽流感防制中都起到了极其重要的作用。禽流感灭活苗的使用, 在控制疫情的同时, 也一定程度上增加了疫病监测中区分疫苗免疫与自然感染的难度,全面的综合防疫措施与基因工程疫苗相结合才是我国禽流感防制的发展方向。 第二：疫苗的应用及种类

现阶段常见的禽流感疫苗有以下几类： （1）全病毒灭活疫苗

禽流感全病毒灭活疫苗是将疫苗株病毒接种于鸡胚尿囊腔中进行增殖，经梯度离心浓缩纯化后，用甲醛或者β-丙内酯灭活处理制得。Takada 等对5周龄雌性ddY小鼠鼻腔接种用甲醛灭活的流感全病毒疫苗20μL，2～3 周后再免，最后1次免疫后1周，分别检测血清和鼻拭子样品，并同时经鼻腔攻击20倍小鼠半数致死量的病毒，结果表明，该疫苗既可产生中和抗体，又能刺激机体CTL 反应，并能抵御不同亚型流感病毒的攻击。李明义等用禽流感病毒

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A/Ostrich/Denmark/77420/96（LPAI- H5N2）株及A/Chicken/ Shanghai/1/98（H9N2）株分别接种易感鸡胚，收获感染胚液并超滤浓缩，再用甲醛灭活并加油佐剂混合乳化制成油乳剂灭活疫苗，将其接种4周龄SPF鸡，结果表明，疫苗安全。 禽流感全病毒灭活疫苗具有制备工艺简单、免疫效果及安全性好、免疫持续时间长且不会出现毒力返强和变异的优点，可保护同种亚型AIV的攻击，有效避免禽流感的大暴发或大流行。但灭活苗本身存在一些缺陷，即影响疫情监测，存在散播病毒的风险，免疫剂量较大，制备成本高等。其最突出的缺点是不能诱导产生有效的黏膜免疫抗体和细胞免疫应答，因而，无法有效地抑制呼吸道中 AIV的复制［11］。 （2）亚单位疫苗

亚单位疫苗是提取AIV具有免疫原性的抗原蛋白，加入佐剂而制成的。这种疫苗安全性好，能刺激机体产生足够的免疫力，但其抗体持续时间短，且成本高。随着重组 DNA及分子克隆技术的发展，可以将HA基因连接到载体质粒上，然后导入表达系统中，经诱导可获得大量表达的免疫原性蛋白，提取所表达的特定多肽，加入佐剂即可制成基因工程亚单位疫苗，这样可大大降低成本。刘明构建了杆状病毒转移载体，分别表达了H5N1亚型禽流感病毒的HA基因和 NA 基因，用这些表达产物免疫SPF鸡，结果显示，NA＋HA 联合免疫组的免疫效果最佳。Wu 等用酵母表达禽流感A/Northern shorel-er/AL/26/2006（H10N7）株的HA蛋白，然后用该蛋白免疫SPF鸡，可以产生与灭活苗相同效果的HI抗体及中和抗体。

（3）重组活载体疫苗

利用对禽类致病性很弱的痘苗病毒或禽痘病毒作载体，构建含有免疫原性基因的重组病毒，用此重组病毒作疫苗，可在动物体内复制，并不断地表达出免疫原性蛋白，从而诱导禽类产生针对目标病原的免疫保护力，此种疫苗称为重组活载体疫苗。Boyle等构建了表达H7亚型HA基因的重组痘病毒，接种2-7日龄鸡，分别于接种后第10，21天，用强毒株攻击，致死保护率分别为80%和100%。获得保护鸡有NP抗体反应，表明重组痘病毒疫苗虽可提供坚强保护，但不能完全阻止攻毒AIV的复制。Swayne 等研究表明，禽流感重组痘病毒疫苗应避免用于经痘病毒疫苗免疫的鸡群或自然感染野毒痘病毒鸡群，否则，将不能诱导其对

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