病毒感染力的滴定(TCID50的测定)

病毒所致的CPE主要表现为细胞变圆、拉丝、脱落等。细胞出现70%以上的CPE时即可将培养瓶反复冻融3次，收获病毒，供检测用。

（二）检测TCID50

1．TCID50的概念 TCID50为半数细胞培养物感染量，是利用不同稀释度的病毒液接种细胞后，能使培养细胞一半发生细胞病变的病毒量。

2．病毒TCID50的测定

（1）稀释病毒液 将细胞培养的病毒液作10倍递进稀释，即稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7…。

（2）接种细胞培养板 取适宜稀释度的病毒液分别与培养液按1∶1混合，接种于96孔细胞培养板上。每个稀释度接种4～6孔，每孔100μL，同时设立病毒对照和细胞对照组。置37℃ 5%CO2培养箱培养72h。观察记录病变情况。

（3）判断 70%以上的细胞出现CPE判为感染。 3．TCID50计算举例 （1）CPE结果见表

TCID50测定结果 (接种剂量100μL)

观察结果 病毒稀释度 CPE数 无CPE数 感染% CPE数 无CPE数 感染% 累计结果 10-5 5 0 100 11 0 100 10-6 4 1 80 6 1 86 10-7 2 3 40 2 4 33 10-8 0 5 0 0 9 0

（2）计算按Reed和Muench法

TCID50的对数=高于50%病毒稀释度的对数＋距离比例×稀释系数的对数

本例高于50%病毒稀释度的对数为-6，距离比例为0.68，稀释系数的对数为-1。代入上式则：

lgTCID50=（-6）＋0.68×（-1）=-6.64 ∴ TCID50=10-6.64，100μL

即：将病毒悬液作10-6.64稀释后，给细胞培养物接种100μL，可以使50%的细胞产生CPE。

（3）结果判断 当细胞培养毒液中病毒的TCID50≥10-6.0方可判为合格。