蛋白质与酶工程知识点(完)---仅供参考

1、易错PCR:通过调整反应条件来使PCR扩增过程中复制错配率增加，在目的基因中随机引入突变，继而获得蛋白质分子的随机突变体 * 提高镁离子浓度或加入锰离子

* 降低体系中一种的dNTP浓度（至少5-10%） * 运用低保真度DNA聚合酶 * 增加DNA聚合酶的浓度

属于无性进化：单一基因内进行遗传突变，费力、耗时，多用于小片段（800bp以下）

2、酶的概念：酶是一类由活细胞产生的，对其特异底物（substrate）具有高效催化作用的生大分子，包括蛋白质和核酸

3、辅酶 :与酶蛋白结合疏松，可用透析或超滤的方法除去(NAD)。 辅基 :与酶蛋白结合紧密，不能用透析或超滤的方法除去(FAD、FMN)

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酶的活性中心 ：或称活性部位，指必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具

有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物。

4、抗体酶或催化抗体 ：是具有催化功能的抗体。本质：免疫球蛋白，即具有催

化作用的免疫球蛋白 5、酶促反应特点：

① 酶促反应具有极高的效率

② 酶促反应具有高度的特异性：绝对特异性、相对特异性、立体结构特异性

③ 酶促反应的可调节性：对酶量的调节，对酶活性的调节

6、诱导契合假说：酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶-底物结合的诱导契合假说 。 7、底物浓度对反应速度的影响：

① 当底物浓度较低时：反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。 ② 随着底物浓度的增加：反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。 ③ 当底物浓度高达一定程度：反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应

8、Km与Vmax的意义