Heidenhain铁苏木素染色液

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Heidenhain铁苏木素染色液

简介：

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

Heidenhain铁苏木素染色液以硫酸铁铵作为氧化剂和分化剂，根据不同的分化程度可显示不同的结构。染色后所有成分均为黑色或深灰黑色，不同组织结构的苏木素着色可被Heidenhain分化液以不同的速度进行性褪去，黑色褪去顺序依次为：线粒体、横纹肌、核染色质。

染色原理：

1、 细胞核染色的原理：

苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 2、 细胞浆染色的原理：

伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。 3、 分化作用：

染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。 4、 返蓝作用：

分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

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组成：

编号 名称 DH0013 3×100ml 2×100ml 100ml 100ml Storage RT 避光 RT 避光 RT 避光 1份 试剂(A): Heidenhain Differentiation 试剂(B): Heidenhain铁苏木素染色液 试剂(C): 伊红复染液(选用) 使用说明书 操作步骤(仅供参考)：

1、 切片脱蜡至水 ① 二甲苯作用。

② (可选)无水乙醇作用。 ③ 95%的乙醇 ④ 90%的乙醇 ⑤ 80%的乙醇 ⑥ 自来水或蒸馏水冲洗 2、染色

① Heidenhain Differentiation媒染 (见注意事项1) ② 蒸馏水冲洗 (见注意事项1) ③ Heidenhain铁苏木素染色液染色 ④ 自来水冲洗

⑤ （可选步骤）伊红复染液染色

⑥ Heidenhain Differentiation分化或用蒸馏水1:1稀释Heidenhain Differentiation分

化，并与自来水冲洗交替进行，显微镜下观察分化程度。(见注意事项2) ⑦ 自来水冲洗 2、脱水、透明、封固

① 80%乙醇 ② 90%乙醇 ③ 95%乙醇作用。 ④ 无水乙醇作用。 ⑤ 二甲苯透明。 ⑥ 中性树脂封片。

染色结果：线粒体、横纹肌、髓磷脂、染色质等呈灰黑色。

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注意事项：

1、 Heidenhain Differentiation媒染时间和Heidenhain铁苏木素染色液染色时间根据不

同的固定液而异。一般情况下，媒染和染色时间控制在1h即可，参考时间为：福尔马林、Bouin固定液、Carnoy固定液1h，Helly、Zenker等重铬酸盐固定液3h，四氧化锇、Flemming固定液24h。

2、 显微镜下控制分化程度，直到出现所需观察的结构。若分化过度，可用苏木素重染相同

时间并重新分化。亦可用蒸馏水2:1稀释Heidenhain Differentiation后再进行分化，以便更好控制分化程度。

3、 切片分化后应彻底冲洗洗掉所有分化液，组织不易褪色。

4、 胞浆复染(伊红或橙黄G)可突出核染色质，尤其在显示染色体或有丝分裂更有效，本试

剂提供了伊红复染液，但不是必需步骤。 5、 切片脱蜡应尽量干净。 6、 系列乙醇应经常更换新液。 7、 冷冻切片染色时间尽量要短。

8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 24个月有效。

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CC0005 CS0001 DC0032 DF0135 DH0006 NR0003 PW0082 TC1213