新型无机纳米载体的构建及其药物 - 基因的高效传递研究 - 曹霞

标准品浓度

(丝竺竺卫竺旦公式(2.6)

(nmol/mgProt)组织蛋白含量(mgPror/ml) 1.3.2.3.4血清ALT!AST含量检测 采用速率法\原理如下:

在ALT速率法测定中酶偶联反应式为: Al止T

L一丙氨酸+a一酮戊二酸不二二二全丙酮酸+L一谷氨酸 LDH

丙酮酸+NADH+H+不忿二全L一乳酸+NAD+ 在AST速率法测定中酶偶联反应式为: AST

L们冬氨酸+a一酮戊二酸摘=二二士草酞乙酸+L一谷氨酸 MDH

草酞乙酸+NADH+H+石二二二二士L一苹果酸+NAD十

上述偶联反应中,NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比,在340nln波 长处,NADH呈现特征性吸收峰,而NAD则没有\因此,可在340lun监测吸 光度的下降速率CvA/min),计算出ALT和AST的活性单位\计算式:ALT(u.L一l卜vA/minx1768(公式2.7) AsT(u#L一,)一v且/minx1768(公式2.8)

卡门单位是分光光度单位,定义为:血清1ml,反应液总体积3ml,反应 温度25e,波长340nm,比色杯光径10cm,每分钟吸光度下降0.O0lA为一 个单位(相当于0.1608林molNADH被氧化)\1.3.2.4数据分析

实验数据均用妥士!表示,数据分析利用SPssfo:windows13.0采用单因素F 检验方法,两组之间比较选择LSD方法\1.3.3 3.3

实验结果

1两种种受试制剂对小鼠MDA含量的影响

根据公式(2.6)分别计算两种受试制剂小鼠体内MDA含量,结果见表2.5\新型无机纳米越些的构建及其药物/基因的高效性递研究

表2.5两种受试制剂对小鼠MDA含量影响(mean士S.D

Table2.5MDAeontentinmousewithtwotestedPreParations(mean士S.D#) GrouPsNumberofanimalsMDA(nmol/mgProt) XilibinanPian 3d一SLBM 12 l1

2.549士1.018 2.316士0.696 CC14grouP

BlanLkeonirolgrouP 12

12

3.734士1.352 3.686士0.962 从表 学差异\

2.5可以看出,CC14对照组与空白对照组小鼠之间MDA含量没有统计 但相对于CCI;对照组,西利宾安和3d一SLBM两组的MDA含量分别降 低了32.9%和38.0%\

3.3.2两种受试制剂对小鼠AsT与ALT水平的影响

根据公式(2.7)和公式(2.8)计算两种受试制剂在小鼠体内AST与ALT 水平,结果见表2.6\

表2.6两种受试制剂对小鼠AST与ALT活性的影响(mean士5.D

Table2.6ASTandALTaetivityinmousewithtwotestedPreParations(mean士S.D.) GrouPSNumberofanimalsAST(IU/L)ALT(IU/L) XilibinanPian 3d一SLBM l2 l2

1244.50士174.65 291.83士76.03w 2490.08士256.91 774.92士223.85w CC14grouP

BlankeontrolgrouP l2 l1

901.00士174.32 140.82士12.79w 1997.58士335.08 91.09士12.70w

注:w表示与CCI4对照组比较尸<0.01,.表示与水林佳组比较尸

从表2.6中可以看出,3d一SLBM组小鼠血浆中AST和ALT活性均明显低于

CC14对照组,具有统训学意义(P<0.01),说明3d一sLBM与市售制剂西利宾胺片 相比,保肝性能更加优越\

2难溶性药物72h高效长效新制剂的研制 2.13d一sLB的制备及药动学研究 2.1.1实验材料

24江苏大学博士学位论文 2.1.1.1主要试剂

a一蔡酚(分析纯,亭新化工厂);甲醇(色谱纯,国药化学试剂有限公司), 乙醚(分析纯,国药化学试剂有限公司);高纯氮(镇江市氧气厂);透析袋(上 海源聚生物科技有限公司);聚维酮K30(上海胜浦新型材料有限公司);大豆磷 脂(上海太伟药业有限公司);W号丙烯酸树脂(淮南山河药用辅料有限公司);

经丙甲纤维素K4M(上海卡乐康包衣技术有限公司);低取代经丙基纤维素(上 海卡乐康包衣技术有限公司);水林佳TM(水飞蓟宾胶囊,天津天士力制药股份 有限公司)\

其他试剂均在国药集团化学试剂有限公司所购\2.1.1.2仪器

液相色谱仪包括:510泵(认值ters)!Nova一pakC18柱!486紫外检测器;涡 旋混匀机(江苏金坛医疗仪器厂);台式冷冻离心机(德国Hereaus);恒温水浴 锅(江苏金坛医疗仪器厂);旋转蒸发仪(Heidolph公司,德国);H66025超声 清洗机(无锡超声电子设备厂)\2.1.1.3动物

参见本章1.2.1.3项目下说明\2.1.2实验方法

2.1.2.13d一SLB的制备

取39SLB,溶于20ml无水乙醇,加入1.5gpSNs浸润24小时,15000印m

离心巧min,沉淀用无水乙醇洗三次,加入10ml蒸馏水冷冻干燥得载药纳米粒 (SLB一PSNs)\

称取SLB19,PVP一K3039,大豆磷脂0.89,W号丙烯酸树脂0.59,加入 40ml无水乙醇溶解(必要时可置于70e水浴中加速溶解)后,于60e水浴, 90rpm旋转蒸发至近干,于70e水浴完全挥去溶剂,置一20e冰箱中2h后,放 置60oC烘箱1Zh,粉碎,过80目筛,得含有SLB的固体分散体(Silybinsolid dispersion,SLB一SD)\取SLB一SD1.89,与轻丙甲纤维素K4M0.49!低取代轻 丙基纤维素0.49,混匀后,加入适量70%的糖浆制备软材,过16目筛得到湿颗 粒,于60e烘30分钟后取出,过16目筛整粒,得缓释颗粒I\

取SLB一SD1.89,与轻丙甲纤维素K4M0.369!低取代轻丙基纤维素0.49,新型无机纳米载体的构建及其药物/基因的高效传递研究

载药纳米粒39混匀后,加入适量70%的糖浆制备软材,过16目筛得到湿颗粒, 于60e烘30分钟后取出,过16目筛整粒,得缓释颗粒H\

缓释颗粒I和缓释颗粒H按照2:3的比例混合后,装入胶囊得水飞蓟宾72h 高效长效制剂(3d一SLB)\

2.1.2.ZHP比法测定血浆中SLB含量 参见本章1.2.2.1项目下说明\

2.1,2.33d一sLB的犬体内药动学研究

分别选取6只比格犬,给药前禁食12h分别给予相同SLB(21.2mg/kg)的

对照制剂(水林佳)!SLB固体分散体(SLB一SD)!载药纳米粒(SLB一PSNS)和 3d一SLB,给药后分别于不同时间点0.25,0.5,l,2,4,6,8,10,12,16,24, 36,48,60,72h前肢静脉取血4ml,血样用肝素抗凝,离心取血浆,血浆于一20 e保存测定,实验期间,给药4h后统一进食\实验结果

1犬体内血药浓度

两只比格犬口服4种制剂后血浆中游离SLB浓度的经时血_药浓度见图2.7\于~~一一一一一一一一一一一r一))一~一一)-一一一一一一)一一)一一一一; 0204060SD

on甘on00一6甘60印40201030`-Jl-u口uaou一妇eJ扫ue\一O. Time(h)

图2.7口服水飞蓟宾4种制剂的犬体内经时平均血药浓度曲线(n=6) F192.7MeanPlasmaconeentration一

timeeurvesofafteroraladministrationofsilybin4 PreParationsinbeagles 3.2药动学参数的计算

参见本章1.2.3.2项目下说明\3.2.1房室模型药动学参数

参见本章1.2.2.1项目下说明,结果见表2.7\江苏大学博士学位论文 表2.7一室模型3d一SLB和对照制剂犬体内游离血药浓度药动学参数

几b2.7PharinacokinetiePararnetersof3d一SLBandeontrolPreParationfree一SLBindogswith

one一comPartmentmodel

DoseCmaxTmaxtl泛MRI,AUCo一\Fonnulations

(mg/kg)(ng加1)(h)(h)(h)(hng加1)

3d一SLB21.2358.3682435.533.8620068.91 Shuilinj.ia21.2540#90712.411.44013.28

根据一室模型拟合药动学数据(表2.7),3d一SLB的Tmax明显大于对照制剂; 3d一SLB的游离药物Cmax小于对照制剂;3d一SLB的MRT较对照制剂有很大的延 长;药时曲线下面积AUC3d一SLB也明显大于对照制剂\2.1.3.3.2非房室模型药动学参数

采用非房室模型依赖法处理3d一SLB犬体内血药浓度数据,求算药动学参数\结果见表2.8\

表2.8非房室模型计算3d一SLB游离血药浓度药动学参数

Thb2.8PhannaeokinetieParametersof3d一SLBfree一drugwithnon一eomPartmentmodel

,-lr11/且卜奋ZL-!!DoseCm\(mg/kg)(h) AUCO一, (hng/ml) 3d一SLB

Sh倪ilinj.ia 21.2 21.2 (ng/ml) 358.368 540.907

24122.31632.15623316 6.1146.3724416.6

根据非隔室模型法拟合药动学数据(表2.8),3d一SLB的Tmax明显大于对照 制剂;3d一SLB的MRT比对照制剂有较大的延长;药时曲线下面积明显大于对照 制剂\其结果与采用隔室模型计算结果相同\2.1.3.4.3相对生物利用度

由相对生物利用度公式2.4计算结果可得,以对照制剂为参比,3d一SLB中药