流式细胞仪操作流程（单标）

流式细胞仪操作流程(单标)

一、开机 (务必按照此顺序开机) 1、 打开下面的小门，推上电源 2、 打开插线板电源开关 3、 开电脑

4、 打开流式细胞仪开关

二、软件准备 1、 打开软件

2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。（等待5～6min startup 完成后再继续） 2、 在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——

new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes编号。

3、 在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方

图。以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。

4、 点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。

三、上机操作

1、 将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，

此时流式细胞仪开始工作。

2、 根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和

SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。

3、 点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中

出现P1，并且其中的细胞变成红色。

4、 选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图

2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。

5、 在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FITC，使其细胞散点图在图2中

处于103以内，直方图的峰值在0－103之间。选择右侧显示屏中的Interval Gate 选项，在图3中点击并选定103数值右侧区域，图中显示P2。调节FITC电压，使P2的百分比值尽量在0.5%以下，并尽量使图3中的图象呈正态分布图。 6、 在Acquisition Dashboard中选择stopping gate内的P1，点击record data,机器自动记录数

值。

7、 记录完成后，点击remove tube，并将试管取下。

8、 放置需要检测的试管，并点击acquire data，机器自动记录数值并在右侧显示屏中显示，

单击record data，记录结果；每一次取下试管前均需点击remove tube，并在出现的进程框未消失前将试管取下。

四、关机

1、 实验完成后，点击菜单栏Cytometer内的shutdown选项，在出现的对话框内选择确定，

待系统清洗完毕后在出现的对话框内点击确定。注：每次实验开始时均需要startup,实

验完成时均需要shutdown。 2、 关闭流式细胞仪。 3、 关闭电脑。

4、 关闭插线板电源。

5、 关闭下面小门内的电源。

图1

图2

图3