蜘蛛毒腺的石蜡切片实验报告

蜘蛛毒腺的石蜡切片

一、 目的要求

1、 熟悉石蜡切片的制作过程。

2、 掌握HE染色的基本原理和染色方法。 二、 实验原理

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片的基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染色法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定材料，染色后不易褪色可长期保持。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 三、 实验用品

（一） 器材 切片机、切片刀、温台、恒温箱、解剖刀、镊子、

剪刀、解剖针、单面刀片、小台木、酒精灯、包埋纸盒、染色缸、烧杯、水盆、熔蜡炉、蜡杯。

（二） 试剂 卡诺（Carnoy）固定液、埃利希苏木精染液、1%亚

甲蓝酒精溶液、1%盐酸乙醇液、各级酒精（100%、95%、90%、80%、70%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%），二甲苯、甘油蛋白粘片剂、中性树胶。 试剂配法：

1、 卡诺氏固定液：100%酒精3份、冰醋酸1份或100%酒精6份、

氯仿3份、冰醋酸1份

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2、 埃利希苏木精染液的配法:苏木精1g、纯酒精50mL、冰醋酸5

mL、甘油50 mL、钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量）、蒸馏水50 mL 配法：

（1） 将苏木精溶于约15 mL的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。 （2） 当苏木精溶解后将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒

精。

（3） 将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。 （4） 将温热的钾矾溶液1滴加入上述染液中，并随时搅动。 （5） 此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着的小块棉花塞起来，放

在暗处通风的地方，并经常摇动以促进它的成熟。成熟的时间约3-4周。若加入0.2g碘酸钠，可立刻成熟。此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期储备无妨。此液可分别与伊红等进行二重染色。

3、1%亚甲蓝酒精溶液：称取亚甲蓝1g溶于100mL蒸馏水（水温加热至35℃-40℃）用玻棒搅拌至亚甲蓝完全溶解为止，冷却倒入棕色试剂瓶备用。

4、1%盐酸乙醇液：盐酸1份70%酒精100份

5、甘油蛋白粘片剂：蛋白50mL、甘油50mL、水杨酸钠（防腐剂）1g。配制时将鸡蛋弄个小孔，将蛋白倒出不要蛋黄，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，滤出透明蛋白液。此时加入等量的甘油，稍微振摇使两者混合均匀。最后加入防腐剂做防腐

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用，可保存几个月。 （三）材料 巨蟹蛛 四、实验步骤

（一）取材：在野外捕捉的活体巨蟹蛛放入70%的酒精中杀死，然后用剪刀从腹柄剪下头胸部，然后在剪掉四队步足，用剪刀和镊子在螯肢和头胸部之间将毒腺剥离出来。

（二）固定：将剥离出来的毒腺放在70%酒精内进行固定24h。 （三）脱水：将固定好的蜘蛛毒腺放入70%（15m）、80%（15m）、90%（15m）、95%（15m2次）、100%（15m）各级浓度的酒精中脱水，最后保存在无水乙醇中。

注意：在各级酒精固定液固定过程中，因酒精挥发而降低酒精浓度，所以整个过程必须在密闭或者有盖的容器中进行。

（四）透明：从无水乙醇取出材料放入28℃的二甲苯+无水乙醇中透明30分钟2次，然后转入28℃的纯的二甲苯中进一步透明2小时。 注意：在透明过程中，因二甲苯容易挥发，所以整个透明过程必须在密闭或者有盖的容器中进行。 （五）浸蜡与包埋

先将恒温干燥箱温度升至57℃待用。

1、 熔蜡 将石蜡放在烧杯里，将烧杯放在放有石棉网的电炉上将石

蜡熔化，等石蜡全部熔化后放入恒温干燥箱中保温。 2、 浸蜡 （整个过程在恒温干燥箱中进行） （2）石蜡Ⅰ 1/2的熔化石蜡+1/2的二甲苯混合液；

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（2）石蜡Ⅱ 3/4的熔化石蜡+1/4的二甲苯混合液； （3）石蜡Ⅲ 5/6的熔化石蜡+1/6的二甲苯混合液； （4）石蜡Ⅳ 纯石蜡

将组织块分别放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ、石蜡Ⅲ和石蜡Ⅳ进行浸蜡，浸蜡时间分别为20分钟、30分钟、30分钟和30分钟。

4、包埋：将熔蜡倾入纸盒中，迅速用温镊子夹取组织块放在包埋框的底部，注意切面方向一般朝下放置，用嘴吹气使表面凝结成一厚层后连同金属框和底板一起浸入冷水中，使其急速均匀地凝固，以免石蜡产生结晶导致切片破碎难于切片。注：如果包埋的组织块数量多，或者组织材料不一样，应进行编号，以免差错。 （六）修蜡和切片

1.修蜡 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面于切片刀刃平行，旋紧。 2.切片

（1）将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （2）将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。

（3）摇动推动螺旋，使石蜡块于刀口贴近，但不可超过刀口。 （4）调整石蜡块于刀口之间的角度与位置，刀片于石蜡切片约成15度左右。

（5）调整厚度调节器到所需要的切片厚度，一般为4~10微米。 （6）一切调整好后可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成

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