中药化学实验全新教材编写

补骨脂素

（2）补骨脂素与异补骨脂素的分离

析出补骨脂素粗品的母液

浓缩至干，氧化铝拌样，进行氧化铝干柱色谱

苯—石油醚（4：1）洗脱，荧光检查，合并相同流份

补骨脂素 异补骨脂素 三、鉴定

1.溶解性试验 取样品少许加稀氢氧化钠1—2ml,加热，观察现象；再加稀酸试液几滴，观察现象。

2.观察荧光 取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外灯下观察荧光与颜色

3.显色反应 取样品少许溶于乙醇中，加异羟肟酸铁试剂，观察颜色。 4.薄层色谱鉴别

样品：①自制的补骨脂素和异补骨脂素的甲醇溶液

②补骨脂素和异补骨脂素的对照品溶液 吸附剂：中性氧化铝，干法铺软板，105活化30cm。 展开剂：①苯—石油醚（8：2）（每50ml加丙酮15滴） 显色：紫外灯下观察荧光 [思考与作业]

（1） 香豆素类化合物有哪些主要理化性质？这些性质在提取、分离和鉴定中有

何应用？

（2） 异羟肟酸铁反应的机制如何？

实验五 黄芩中黄酮类化合物的提取、分离和鉴定

黄芩为唇形科植物Scutellaria baicalensis Georgi. 的干燥根。味苦，性寒。具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效，用于湿温、暑温胸闷呕恶、湿热痞满、泻痢、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐衄、痈肿疮毒、胎动不安等。现代药理实验证明具有清热、抗菌、利尿、降压和镇静等作用。它的主要成分之一黄芩苷具有镇静、解热和利尿作用。

黄芩含有多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷（baicalin）、黄芩素（baicalein）、汉黄芩苷（wogonoside）、汉黄芩素（wogonin）、木蝴蝶素-A（oroxylin）、黄芩黄酮Ⅰ（skullcapflavoneⅠ）、黄芩黄酮Ⅱ（skullcapflavoneⅡ）、白杨黄酮6C-葡萄糖-8C-阿拉伯糖苷（chrysin6C-glucoside8C-arabinoside）、白杨黄酮6C-阿拉伯糖-8C-葡萄糖苷（chrysin6C- arabinoside8C- glucoside）、β-谷甾醇（β-sitosterol）等。其主要化学成分的结构和理化性质如下。

COOHOOHOHOHHOOHOOOOHO

O

黄芩苷 黄芩素

COOHOOHOHOHOOOCH3OOCH3HOOOH

OHO

汉黄芩苷 汉黄芩素

1.黄芩苷 淡黄色针晶，mp223℃，[α]D18-144.9°（吡啶+水）；易溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、吡啶，微溶于热冰醋酸，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等溶剂。黄芩苷有羟基，呈酸性，故可溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠等碱液，但在碱液中不稳定，渐呈暗棕色。

2.黄芩素 黄色针晶，mp264-265℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于乙醚、氯仿、较难溶于苯。在碱液中溶解，但不稳定，易氧化，呈绿色。

3.汉黄芩苷 黄色针晶，无明显熔点，230℃变为红棕色，302℃变黑分解。几乎不溶于水和常见有机溶剂，微溶于50%乙醇的甲醇。

4.汉黄芩素 黄色针晶，mp203℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于乙醚、氯仿、苯，难溶于水。 一、目的要求

（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法 （2）了解苷类鉴定的一般程序及方法 二、实验原理

黄芩苷和苷元在热水中溶解度大，在强酸性条件下易析出，利用此性质从黄芩中提取总黄酮类化合物；并利用其不溶于酸的性质与酸溶性杂质分离，得到较纯的总黄酮；利用黄芩苷与苷元极性不同用溶剂法进行分离。 三、提取分离

黄芩粗粉100g（三个组共用）

投入8倍量的沸水中，煎煮20min, 用脱脂棉过滤

滤液 滤渣 6倍量水同法煎煮2次，每次20min,滤过

滤液 滤 渣

合并，滴加浓HCL酸化至PH1-2，充分搅拌， 加热至80℃，保温30min，滤过（准备水浴锅）

滤液 沉淀

用热水洗涤2-3次，抽滤

沉淀（第一次） 移至150ml锥形瓶中，加85%的乙醇超声洗涤 4-5次，每次50ml，抽滤

乙醇液 沉淀（主含黄芩苷）

回收溶剂 置索氏提取器中，

加甲醇提取至提取液呈色极淡为止

残留物 甲醇提取液

置索氏提取器中， 浓缩，放置析晶，抽滤 加甲醇提取至提取液 呈色极淡为止

氯仿提取液 结晶（黄芩苷）（第二次）

浓缩，放置放置析晶，抽滤 取结晶1g置圆底烧瓶中，加甲醇100ml，

加热回流20min，趁热过滤

黄色粒状结晶 甲醇溶液

用丙酮或甲醇重结晶数次 浓缩，放置析晶，抽滤

黄芩素 精制黄芩苷

四、鉴定

1.熔点的测定 使用熔点测定仪，测定黄芩苷和黄芩素的熔点。 2.显色反应

（1）盐酸镁粉反应：取样品少许，加稀乙醇热溶，加镁粉少许，滴加弄盐酸数滴，必要时水浴加热，观察溶液颜色的变化。

（2）三氯化铁反应：取样品少许，溶于水或乙醇中，加1%三氯化铁醇溶液一滴，观察溶液颜色的变化。

（3）Molish反应：取样品少许置于试管中，加0.5ml乙醇溶解，再加入1%α—萘酚溶液数滴；然后沿管壁加入浓硫酸约0.5ml，观察两溶液界面处颜色的变化。 3.色谱鉴定

样品的制备（黄芩苷的水解）：精密称取黄芩苷约0.5g，置干燥25 ml三角瓶中，加入浓硫酸3ml，用玻棒搅拌均匀，滴加蒸馏水约2ml使黄芩苷溶解，得透明橙红色溶液。水浴加热15min左右，放冷。将此溶液在搅拌下倾入100ml冰水中，析出黄色沉淀，抽滤并用水洗涤至无酸性反应，干燥。

水解所得黄色沉淀，用氯仿反复提取，合并氯仿溶液，浓缩回收乙醇至干。残留物再用甲醇重结晶得黄色针晶，为黄芩素，供苷元的鉴定。

滤去苷元后的水液，分取1/10。加固体碳酸钡使水溶液至中性，滤去碳酸钡沉淀。滤液浓缩至2-3ml，供糖的鉴定。（第三次） （1）糖的纸色谱鉴定

样品：水解所得糖的溶液。

对照品：葡萄糖醛酸（准备葡萄糖对照品） 支持剂：新华1号滤纸

展开剂：正丁醇—醋酸—水（4：1：5，上层） 显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试液（准备显色瓶） 于105℃烘10min，显色。葡萄糖醛酸Rf为0.16（文献值） （2）黄芩苷和苷元的纸色谱鉴定

样品：自制黄芩苷和黄芩素的乙醇溶液。

对照品：①黄芩苷对照品的乙醇溶液 ②黄芩素对照品的乙醇溶液 支持剂：新华1号滤纸