马振斌论文 - 图文

4 分析与讨论

肝细胞凋亡为自身程控性细胞死亡，其主要生理变化为肝细胞通过嗜酸性变而发生固缩，胞体变小，胞质变致密，DNA裂解、核浓缩致消失，形成嗜酸性小体。细胞凋亡过程包括凋亡的启动、凋亡调控蛋白间的相互作用、蛋白水解酶的活化、下游的级联反应等阶段。其中，凋亡启动是细胞凋亡过程的第一步，其诱导因素有很多，既有内源性因素（如许多应激条件、化学治疗试剂和药物）也有外源性因素（如Fas和TNF-R）。而且诱导因素不同，启动细胞凋亡的方式不同，所扳动的信号转导途径也不一样。目前比较清楚的是细胞凋亡的膜受体通路（Fas/FasL），以及Cyt-C和Caspase激活的生物化学途经。前者主要通过配体诱导受体三聚体化，在细胞膜上形成凋亡诱导复合物，引起细胞一系列特征性变化，导致细胞死亡。后者通过线粒体释放到细胞浆的细胞色素C与Apaf-1和Caspase-9形成凋亡复合体，其中的Caspase-9被激活后继而激活Caspase-3，诱导细胞凋亡。近年来不断有研究发现，作为目前被广泛使用的食品和饲料添加剂的柠檬酸也会引起组织细胞的凋亡。如2009年沈立明等发现柠檬酸镧能诱导癌细胞发生凋亡[19]。邓雯等在柠檬酸对小鼠辜丸影响的研究中发现，240 mg/kg?bw和480mg/kg?bw柠檬酸处理小鼠后，其睾丸组织出现凋亡特征的DNA“梯状”条带；而且Caspase-3活性也显著高于对照，表明柠檬酸能够诱导小鼠睾丸组织细胞的凋亡[28]。

在本研究中，Caspase-3活性检测结果显示，与对照组相比，柠檬酸低、中、高剂量处理组小鼠肝脏组织中每毫克蛋白酶活力分别提高了32%，34%、27%，并且柠檬酸低、中、高剂量组Caspase-3酶活性与对照组相比均有显著差异（P<0.05）。该结果提示，3种剂量的柠檬酸均能显著提高Caspase-3活性，促进小鼠肝细胞凋亡。DNA Ladder 检测结果显示，对照组中无DNA Ladder的出现；柠檬酸低、中、高剂量处理组中均出现6条凋亡特征性的DNA“梯状”条带，表明柠檬酸处理组小鼠肝细胞的确发生了凋亡。综合上述结果，与对照组相比，不同浓度的柠檬酸处理后均能引起小鼠肝细胞的凋亡。另外，中剂量处理组的Caspase-3酶活力要比其他两个处理组的高，且DNA“梯状”条带更为明显，说明柠檬酸在240 mg/kg·bw时更能促进肝细胞凋亡。但另一方面，与柠檬酸低、中剂量处理组相比，高剂量处理组的Caspase-3酶活性反而降低。而在张自强等人有关柠檬酸对小鼠肝脏组织氧化应激影响的研究中发现，各柠檬酸处理组小鼠均出现肝细胞索排列紊乱，中央静脉大量淤血，周围淋巴细胞浸润等一系列病变，且高剂量柠檬酸组小鼠的肝脏T-SOD 和GSH-Px 活性显著降低[29]，他们的结果说明，虽然各剂量的柠檬酸均能对肝细胞造成损伤，但高剂量柠檬酸的毒性更强，这显然与本研究结果不完全一致。其原因可

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能是是由于高剂量柠檬酸毒性增加造成一部分肝细胞坏死而使凋亡的细胞数量减少所致。

5 结论

经Caspase-3活性检测试验结果分析和DNA Ladder 进行检测，得出如下结论：一定剂量的柠檬酸可促进小鼠肝脏组织Caspase-3酶活性的显著增加，进而促进细胞凋亡，其中，中剂量柠檬酸（240 mg/kg?bw）的细胞凋亡诱导效应最为明显。

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