血凝仪SOP文件CA1500

文件編號：Lab.SOP-COA-0003 版 次：01 单位名称： 标准操作规程 —— 凝血酶原时间测定（PT） 編修日期：05.09.15 頁 次：第 頁共 頁 编 写：

1.项目名称：血浆凝血酶原时间测定（prothrombin time ，PT）

2.检验原理：

2.1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理——血浆样本经过一定时间的温育后，加

入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过 程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分 比原理方法求得凝血 时间。 2.2. 反应方法学溯源：

凝血酶原时间（PT）测定是Quick于1935年创立的。在受检血浆中加入过量的组织凝 血活酶（人 脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血 酶，后者使纤维蛋白 原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。 其凝固时间取决于凝血因子Ⅱ、 Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。该试验是反映外源凝血系统最 常用的筛选试验。

3.设备参数：

3.1.设备:仪器型号Sysmex CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：凝血酶原时间-秒(S), 国际标准化比值-INR, 凝血酶原活动度-%, 凝血酶原比值 -PTR

3.3.样本量：50μl ,试剂量:100ul0

3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：120秒 3.5.重复性：CV≤2%

4.试剂及配套品：

4.1. 反应试剂:凝血活酶含钙试剂（Thromborel? S） 4.1.1商标：德灵（DADE BEHRING）

4.1.2包装规格： 10×10ml

4.1.3使用方法:每瓶用10ml蒸馏水溶解,须放置室温或37℃30分钟后才使用

保存:未溶解试剂2~8℃ 至包装有效期,试剂溶解后2~8℃ ：7天

4.1.4货号： OUHP49

4.1.5参数：ISI（国际敏感度指数）≈1.02

(每次更换试剂批号需将包装中所附ISI指数表中对应仪器型号的ISI值输入仪器中.(输入方法:主菜单→STANDARD CURVE→SELECT TEST→PT→MANUAL ENTR

Y→光标在ISI处输入ISI值

4.1.5.成分：Thromborel? S Reagent中包含 :

a. 冻干人胎盘促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin） b. 氯化钙 (calcium chloride) c. 稳定剂 (stabilizers) d.防腐剂（Preservatives）

4.2． 清洗液（Clean I） :用于测定过程中的吸样针冲洗 4.2.1.商标：希森美康（Sysmex）

4.2.2.包装规格：50ml

4.2.3.货号：GSA500A 4.2.4.成分：1%次氯酸钠及活性成分 4.2.5.使用方法:液体试剂,直接使用.

4.2.6储存:没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开盖后放于仪器上有效期仅24小时

4.3 标准血浆: （Standard Human Plasma）-用于PT%的定标校准

4.3.1商标：德灵（DADE BEHRING）

4.3.2货号： ORKL 13 4.3.3包装:6X1ml 4.3.4.使用方法:1ml蒸馏水溶解,放置15分钟后使用 4.3.5储存:没开配试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开配后保存条件: 室温: 2h, 2~8℃: 4h, -20°C分装冷冻保存：<2周, -70°C分装冷冻保存：<6个月

4.4.质控血浆（Ci-Trol?）

4.4.1.商标：德灵（DADE BEHRING）

4.4.2货号： Level 1 (Normal), 291070 10×1ml Level 2 (Abnormal),291071 10×1ml Level 3 (Abnormal), 291072 10×1ml

4.4.3.使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用

4.4.4储存: 没开配试剂放2~8℃存放至包装有效期, 开配后保存条件: 室温: 2h, 2~8℃: 4

h,冷冻分装保存：-20°C <2周,-70°C <6个月

5. 操作步骤：

5.1. 开机：开打印机电源→开CA1500仪器右侧电源→开机后机器进行自检、预热， 当屏幕上显示“Ready”时可以进行试验 5.2.每日针冲洗：在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行针冲洗

5.3.准备试剂：按照仪器试剂位置设定，把上述每项的试剂准备好，放在相应的位置 5.4.准备反应杯：打开仪器顶部反应杯储存槽，查看反应杯是否够量，需及时添加

5.5.准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10 个样本），

准备好放在进样器上 5.6.输入试验项目：按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击PT，使PT项目下显示“—”

变为“○”，按“↑或↓”将需要测试标本如上操作选择； 5.7.输入样本号：按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号

5.8.开始检测：待一切准备工作就绪，按下屏幕右上角“START”键，仪器开始检测…

5.9.查看结果：返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下

“Stored Date”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”，查 看凝集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息，有错误报警的标本需考虑重测 5.10.关机前冲洗针：关机前需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute” 5.11.关机：回到主屏幕下，切断仪器电源，关闭打印机。

6. 参考范围： PT（sec）：10.8—13.5 s

PT% ：80%—120% PTR ：0.85 - 1.15 INR ：0.8—1.20

7. 临床意义：

7.1.PT延长 :

7.1.1外源凝血系统的因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纤维蛋白原减低，如先天性某因子缺乏症和低 （无）纤维蛋白原血症，但均很少见，获得性的见于DIC、原发性纤溶、维生素K缺乏症、肝脏 疾病等。

7.1.2．血循环中抗凝物质增加，如肝素或FDP增多等。 7.2. PT缩短 :口服避孕药、高凝状态和血栓性疾病等。

7.3.用于香豆素类等口服抗凝剂的监控 7.3.1一般认为以维持PT值在参考值的2倍左右（1.3~2.5倍），或PTR为1.3~1.5（最大不 超过2）为宜。 7.3.2．PT%应控制在40%以上，减低到40%有出血倾向。 7.3.3．不同情况下口服抗凝药治疗的最佳抗凝强度时INR的范围： a.术前两周或术中口服抗凝药，INR为1.5—3.0； b.原发或继发静脉血栓的预防，INR为2—3；

c.活动性静脉血栓、肺梗塞、复发性静脉血栓的预防，INR为2—4； d.动脉血栓栓塞的预防，心脏换瓣术后，INR为3—4.5。

8.标本要求：

8.1.使用3.8%拘橼酸钠溶液作为抗凝剂； 8.2.血样与抗凝剂的比例为9:1，如果血球压积<20%或>55%，则需调整这个比例，方法是：0.00185×血液毫升数×(100-压积)=抗凝剂毫升数；

8.3.血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；

一采样后60分钟内进行；

一分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除；

8.4.血浆保存条件： 温度 室温 2—8℃ -20℃ -70℃ 有效时间 ≤2hr ≤4hr ≤2Weeks ≤6months 8.5.低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。

8.6.所有与标本接触的试管、吸管等均采用用塑料或硅化处理的。

8.7. 拒收标本:严重溶血、黄疸、脂血或出现凝块,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的

9. 参考依据：《CA1500全自动血凝仪使用手册》，试剂使用说明书

10. 附件：

10.1 CA1500常规操作流程 10.2. PT试剂使用说明书 文件編號：Lab.SOP-COA-0004 版 次：01 单位名称： 标准操作规程 — 血浆纤维蛋白原定量测定（Fib） 編修日期：05.09.15 頁 次：第 頁共 頁 编 写：

1.项目名称：

纤维蛋白原(Fibinogen)

2.检验原理：

2.1.检测原理：全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理——血浆样本经过一定时间的温育后，加

入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血时间.先用此方法分别测定不同FIB浓度的标准血浆制定横坐标为凝血时间,纵坐标为Fib浓度的Fib标准曲线,在测定病人血浆时测定的凝血时间与标准曲线上对应的时间-浓度值一一对应,仪器则自动报告出Fib含量(g/L).

2.2. 反应方法学溯源：纤维蛋白原测定（Clauss法）原理-37℃条件下，凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体纤维蛋白。当凝血酶浓度较高（约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度,凝血酶凝血时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。

3.设备参数：

3.1.设备:仪器型号Sysmex CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：报告单位 秒(S),Fib定量g/L

3.3.样本量：1/10稀释标本100ul(10ul血浆+90ul缓冲液),试剂量:50ul 3.4.检验时间：在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：190秒 3.5.重复性：CV≤4%

4.试剂及配套品：

4.1.反应试剂：凝血酶试剂（Thrombin Reagent）

4.1.1商标：德灵（DADE BEHRING） 4.1.2包装规格： 10×5ml 4.1.3货号：B4233-27

4.1.4成分：牛凝血酶冻干粉（lyophilized preparation of bovine thrombin）（近似

100 NIH units/ml）