水样及浮萍实验测定方法

有变化，生长旺盛的幼叶子，常随时间而会显著增加，所以要进行时期含水量的对比就不恰当）。一般采用相对含水量表示组织的水分状况，比用自然含水量表示为好。

(1)同1，先求得组织鲜重Wf，然后将样品浸入蒸馏水中数小时，使组织吸水达饱和状态（浸水时间因材料而定）。取出用吸水纸吸去表面的水分，立即放于已知重量的称量瓶中称重，再浸入蒸馏水中一段时间后取出吸干外面水分，再称重，直至与上次重量相等为止。此即为植物组织在吸水饱和时的重量，称饱和鲜重Wt。再如1法将样品烘干，求得组织干重Wd。Wt－Wd即为饱和含水量。 (2)计算

相对含水量%（组织含水量占饱和含水量的%）

浮萍体内硝酸盐氮的测定（水杨酸法）

1、原理

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在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。

生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。 2、仪器

分光光度计；天平（感量0.1mg）；20ml刻度试管；刻度吸量管0.1ml、0.5ml、5ml、10ml各1支；50ml容量瓶；小漏斗（φ5cm）3个；玻棒；洗耳球；电炉；铝锅；玻璃泡；7cm定量滤纸若干。 3、试剂

500mg/L 硝态氮标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水中，定容至200ml。

5%水杨酸─硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。

8%氢氧化钠溶液：80g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中即可。 4、操作步骤

1. 标准曲线的制作

（1）吸取500mg/L 硝态氮标准溶液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml分别放入50ml容量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。

（2）吸取上述系列标准溶液0.1ml，分别放入刻度试管中，以0.1ml蒸馏水代替标准溶液作空白。再分别加入0.4ml 5%水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8% NaOH溶液9.5ml，摇匀冷却至室温。显色液总体积为10ml。

（3）绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm波长下测定光密度。以硝态氮浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。

2. 样品中硝酸盐的测定

（1）样品液的制备 取一定量的植物材料剪碎混匀，用天平精确称取材料2g左右，重复三次，分别放入三支刻度试管中，各加入10ml无离子水，用玻璃泡封口，置入沸水浴中提取30min。到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

（2）样品液的测定 吸取样品液0.2ml（空白加蒸馏水）分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸—硫酸溶液0.5ml，混匀后置室温下20min，再慢慢加入9.5ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其光密度。

5、结果计算

在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮浓度，再用以下公式计算其含量。

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浮萍NO3-N（μg/g）=(ρ/2)×V/W

－

式中， ρ—— 从标准曲线查得NO3-N的质量浓度（μg/ml）；

V—— 提取样品液总量（ml）； W—— 样品鲜重（g）；

ρ/2—— 显色时取样0.2ml，标准曲线0.1ml。

浮萍体内全氮的测定（H2SO4- H2O2消煮，靛酚蓝比色法）

1、方法原理

植物样品在浓H2SO4溶液中，历经脱水碳化、氧化等一系列作用，而氧化剂H2O2在热分解浓H2SO4溶液中分解出的新生态氧（H2O2 H2O+[O]）具有强烈的氧化作用，分解H2SO4没有破坏的有机物和碳，使有机氮、磷转化为无机铵盐和磷酸盐等。消煮液中的氨在碱性条件下（pH=10.5~11.7）与次氯酸钠盐和苯酚作用，生成水溶性燃料靛酚蓝，在0.05~0.5mg/L N范围内，蓝色深浅与NH4+-N含量成正比，可用比色法测定。 2、 仪器

消煮管、控温消煮炉、分光光度计。 3、 试剂

浓硫酸；

300g/L H2O2； 酚溶液：10g苯酚和100mg硝普钠（2H2O）溶于少量水稀释至1L，贮于棕色瓶，4℃冰箱备用；

次氯酸钠溶液：10gNaOH，7.06gNa2HPO4 ?7H2O（或者9.43gNa2HPO4 ?12H2

O），31.8gNa3PO4?12H2O和10mlNaOCl溶于1L水中，贮于棕色瓶，4℃冰箱备用；

掩蔽剂：酒石酸钾纳（4H2O）ρ=400g·L-1与EDTA二钠（2H2O）ρ=100g·L-1等体积混合，每100ml混合液中加0.5mlNaOH（c=10 mol·L-1）；即得清亮掩蔽剂溶液

铵态氮标准贮存溶液 [ρ（N）=100 mg·L-1]：称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4，分析纯]0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L。

铵态氮标准溶液 [ρ（N）=5 mg·L-1。 4、 操作步骤

空白试验做三个。

称取磨细烘干的植株样品（过0.25~0.5mm筛）0.3000 g置于50ml消化管（先烘干，防止样品粘附在瓶颈上）中，先用水湿润样品，然后加入浓H2SO4 5 mL，轻轻摇匀（最好放置过夜），瓶中放一个弯颈漏斗，在消化炉上先低温缓缓加热，待浓H2SO4分解冒白烟逐渐升高温度。

当溶液全部呈棕黑色时，从消化炉上取下消化管，稍冷，逐滴加入H2O2 10滴，并不断摇动消化管，以利反应充分进行。再加热至微沸10~20ml，稍冷后再加入H2O2 5~10滴。以此反复2~3次，直至消煮液呈无色或清亮色后，再加热5~10 min，以除尽剩余H2O2。 取出消化管冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。将消煮液用水定容至50ml，取过滤液（或者放置澄清的上清液）供N、P、K等元素测定。消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。

将待测液用水准确稀释10倍（依情况定），吸取稀释后的溶液1.00ml（含NH4+-N 2.5~25μg）于50ml容量瓶中，加入1ml EDTA-甲基红溶液，用0.3mol/L NaOH溶液调节至pH=6左右（甲基红由红色变为黄色），再依次加入5ml酚溶液和5ml次氯酸钠溶液，加1 mL 掩蔽剂以溶解可能生成的沉淀物，摇匀，用水定容。1h后，在625nm波长处比色，用空白试验溶液校正。

标准曲线：分别吸取铵态氮标准溶液0、0.5、1、2、3、4、5ml于50ml容量瓶中，浓度依次为0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L。（50ml容量瓶中各加1ml稀释10倍的空白消煮溶液，同上操作，调节溶液pH及显色，测定吸收值后绘制标准曲线。） 5、结果计算

浮萍全N（%）=ρ×V×分取倍数×10-2/m

式中， ρ—— 从标准曲线查得显色液N的质量浓度（μg/ml）； V—— 显色液体积（ml）；

分取倍数—— 消煮液定容体积（ml）/吸取消煮液体积（ml）； m—— 烘干样品质量（g）。

浮萍体内总磷的测定（H2SO4- H2O2消煮，钼锑抗比色法）

1、方法原理

植物样品在浓H2SO4溶液中，历经脱水碳化、氧化等一系列作用，而氧化剂H2O2在热分解浓H2SO4溶液中分解出的新生态氧（H2O2 H2O+[O]）具有强烈的氧化作用，分解H2SO4没有破坏的有机物和碳，使有机氮、磷转化为无机铵盐和磷酸盐等。溶液中的磷用钼锑抗比色法测定。 2、仪器

消煮管、控温消煮炉、分光光度计。

3、试剂

浓硫酸；

300g/L H2O2；

50μg/ml P标准贮液：准确称取经105℃烘干的KH2PO4 0.2195g，溶于水，移入1000ml容量瓶，加水至约400ml，加浓硫酸5ml，用水定容，装入塑料瓶中低温保存备用；

5μg/ml P标准溶液：吸取上述P标准贮液25ml，稀释至250ml。（此溶液不宜久存）；

2，6（4）-二硝基酚指示剂溶液：溶解二硝基酚0.25g于100ml水中。此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时黄色；

4mol/L NaOH溶液：溶解NaOH16g于100ml水中；

2mol/L（1/2 H2SO4）溶液：吸取浓硫酸6ml，缓缓加入80ml水中，边加边搅，冷却后加水至100ml。

钼锑抗显色剂：见水中总磷的测定。

4、操作步骤

空白试验做三个。

称取磨细烘干的植株样品（过0.25~0.5mm筛）0.3000 g置于50ml消化管（先烘干，防止样品粘附在瓶颈上）中，先用水湿润样品，然后加入浓H2SO4 5 mL，轻轻摇匀（最好放置过夜），瓶中放一个弯颈漏斗，在消化炉上先低温缓缓加热，待浓H2SO4分解冒白烟逐渐升高温度。

当溶液全部呈棕黑色时，从消化炉上取下消化管，稍冷，逐滴加入H2O2 10滴，并不断摇动消化管，以利反应充分进行。再加热至微沸10~20ml，稍冷后再加入H2O2 5~10滴。以此反复2~3次，直至消煮液呈无色或清亮色后，再加热5~10 min，以除尽剩余H2O2。

取出消化管冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。将消煮液用水定容至50ml，取过滤液（或者放置澄清的上清液）供N、P、K等元素测定。消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。

取消煮好经过滤的待测液2~5ml（含P 5~25μg）置于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，滴加4mol/L NaOH溶液直至溶液变为黄色，再加2mol/L（1/2 H2SO4）1滴，使溶液的黄色刚刚褪去。

然后加钼锑抗试剂5ml，再加水定容至50ml，摇匀。30min后，用700nm波长进行比色，以空白液的透光率为100（或吸光度为0），读出测定液的吸光度值。

标准曲线：准确吸取5μg/ml P标准溶液0、1、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶中（0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml P），加水至约30ml，再加空白试验定容后的消煮液5ml，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5ml，最后用水定容至50ml。30分钟后比色。 5、 结果计算

浮萍全P（%）=ρ×V×分取倍数×10-4/m

式中， ρ—— 从标准曲线查得显色液P的质量浓度（μg/ml）； V—— 显色液体积（ml）；

分取倍数—— 消煮液定容体积（ml）/吸取消煮液体积（ml）； m—— 烘干样品质量（g）。

浮萍体内钙的测定（干灰化-原子吸收分光光度法）

1、方法原理

将植物样品灼烧，使有机质氧化成CO2和H2O等挥发，剩下Ca、Mg等不可燃的灰分元素的氧化物。然后用稀盐酸溶解灰分。灼烧的温度以525±25℃为宜，不可过高或太急促。温度太高会引起Na、K的氯化物挥发损失，而且Na、K的磷酸盐和硅酸盐也易熔融而把炭粒包藏起来不易燃尽，灼烧太急促也会使微粒飞失。灰分经稀盐酸溶解后，可用原子吸收分光光度计测定Ca、Mg和其他微量元素（除硼外）。 2、仪器

高温电炉、原子吸收分光光度计。 3、 试剂

100μg/L钙标准溶液 50g/L氯化锶或氯化镧溶液 1.2mol/L HCl 4、 操作步骤

称取烘干植株样品（过1mm筛）5.000g于30ml瓷坩埚中，加1~2ml 95%乙醇溶液，使样品湿润。然后进行预灰化处理（现在60~70℃吹干，然后再105℃烘，测得其水分含量）。样品预灰化后放入高温箱式电炉中，加热到525℃左右，保持约1h，烧至灰分近于白色为止。

然后降温至200℃以下，取出坩埚，冷却至室温后用少量水湿润灰分，分次滴加稀盐酸溶液，慎防灰分飞溅损失，待作用缓和后，添加稀盐酸溶液至约20ml，加热至沸，使残渣

溶解。趁热过滤，并用水洗坩埚及残余物数次。滤液盛于50ml容量瓶中，加入50g/L氯化锶或氯化镧溶液1ml，用水定容。此为含盐酸的待测液，用原子吸收分光光度计测定。

标准曲线：吸取100μg/L钙标准溶液0、1、2、3、4、5ml于50ml容量瓶，吸取待测溶液相同体积的空白酸液（即1.2mol/L HCl约20ml的稀释液），再各加入50g/L氯化锶或氯化镧溶液1ml，用水定容。即得0、2、4、6、8、10μg/ml Ca标准系列溶液，用原子吸收分光光度计测定。 5、结果计算

浮萍全Ca（g/kg）=ρ×V×分取倍数×10-4/m

式中， ρ—— 从标准曲线查得Ca的质量浓度（μg/ml）； V—— 测定时定容体积（ml）；

分取倍数—— 待测液定容体积（ml）/吸取待测液体积（ml）； m—— 烘干样品质量（g）。