家畜繁殖学

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第二节 采精

采精 (semen collection) 是AI首要技术环节 一、采精前的准备

（一）器材的清洗与消毒

玻璃器材；橡胶制品；金属器械；溶液；其它用品。 （二）假阴道的准备 由外筒（外壳）、内胎、集精杯、气嘴和固定胶圈等组成。

具有适宜的温度；恰当的压力和一定的润滑度基本条件，才能满足公畜需要，顺利地采得精液。 （三）采精场地的准备

良好的固定场所，以便种公畜建立条件反射，同时保证人畜安全和防止精液污染。 场面要平坦，又不能过于光滑，最好铺橡胶垫以防打滑。易清洁消毒，备紫外线灭菌。 （四）台畜的准备 台畜有真假之分 ? 真台畜：

同种母畜；阉畜或另一头公畜。选择健康无病、体格健壮、大小适宜、性情温顺而无踢腿等恶癖的同种家畜。

牛保定在栏内；马两后蹄用绳子系着固定在颈部，并有人牵；兔用左手固定头颈部。

? 假台畜：

模仿母畜体型大小，选用钢材或木材、塑料等材料，一种方便、清洁、安全的极为有效的方法。 （五）种公畜的准备 开始时需调教训练。

体表的清洁，0.1%高锰酸钾洗净并抹干，最好再用生理盐水冲洗！ 诱情——性的准备，公畜的性刺激。

二、采精方法及其技术要领

（一）假阴道法 利用人工模拟发情母畜的阴道环境，诱导公畜在其中射精的方法。 采精者一般应站立于公畜右后侧。 ? 牛、羊、（兔）对假阴道的温度比压力敏感；向前一冲即射精。手托包皮。 ? 兔耸身向前一冲发生射精。滚下发出尖叫声，有时蹬脚。

? 马、驴对假阴道的压力比温度要求高；来回抽动数次才会射精。可用手握住阴茎导入假阴道，但不

要碰龟头。

假阴道由外壳、内胎、集精杯和附件组成。 （二）手握法和筒握法

筒握法具有假阴道和手握法的双重优点，用双联球打气调节压力，但不如手握法普及。 （三）电刺激法 用于性欲差、肥胖、爬跨困难的公畜。

电极探头置于直肠底壁靠近输精管壶腹部；环式电极固定于腰荐部神经。 一般射精量较大而密度较低！

（四）按摩法 适用于牛、犬、家禽等; 鱼繁殖季节的确定、采卵和采精。

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家畜繁殖学 编辑W.M. 动科1202 三、采精频率 (frequency of semen collection)

根据睾丸定期内产生精子的数量，附睾的贮精量，每次射精量和饲养管理水平衡量。 公牛 2~3次/周，连续采精两次，一般第二次精液数量和质量较好。 公猪 1次/2天，一岁左右和四岁以上三天一次为宜。 马、驴 2~3次/周

绵羊 配种季节短，射精量少，而附睾贮精量大，一天可多次。

第三节 精液品质检查

一、基本操作原则

1、精液置于30℃左右水浴中；室温20~30℃；显微镜37~38℃ 2、迅速检查，取样代表性

3、常规重点检查和定期全面检查 二、检查项目及其方法 （一）精液外观检查

1、精液量 (semen volume) 猪、马、驴等有胶状物，过滤后测量。

2、色泽： 一般为乳白色或灰白色；密度高，乳白色程度高，透明度愈低。有乳黄色，核黄素含量高。 颜色异常： 浅绿或黄色，则表明混有脓液或尿液 淡红色或红褐色，则含有鲜血或陈血 3、气味：略带腥味

4、云雾状：牛、羊精液，密度高而混浊不透明，低倍显微镜下如翻腾滚滚的云雾状。可初估密度和活率的高低。

（二）精液pH值

一般为7.0左右。牛、羊6.5~6.9；猪、马 7.4~7.5。同种种公畜的 pH确良偏低其品质较好。 （三）精子活力 (sperm motility)

是指精液中呈前进运动精子所占的百分率。 1、目测评定法 200~400倍

平板压片法；精液检查板法（计算机）

密度大的牛、羊或猪的浓份精液，可用生理盐水；5%葡萄糖溶液或其它等渗液稀释后再进行制片。 T 37~38℃

活力评定一般用十级评分法：1.0；0.9；0.8-------0.1 若无前进运动精子则以“0”表示。

原精液一般为0.7~0.8；授精活力——液态保存在0.6以上；冻精0.3以上。 2、死活精子计算法 400~600倍

染色——活精子，不着色。活精子细胞膜半透性机能，阻止色素渗入。 ——死精子，着色。死精子特别是核后帽通透性增加。 常用的染色剂有伊红、刚果红等。 3、其他检查法

显微镜电视录像计算法等。

（四）精子密度 (sperm concentration) 指每毫升精液中所含精子数。

1、目测法又称估测法 稠密；中等；稀薄 2、血细胞计数法 400~600倍

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家畜繁殖学 编辑W.M. 动科1202 3% NaCl 稀释样品并致死精子。0.5处至101处——稀释200倍。

计算 5 个大方格（即80个小方格）内的精子数，线上精子（头部）采取数上不数下；数左不数右的方法。大方格四角加中间。

1 ml 原精液内的精子数 = 5个大方格内的精子数×5（等于计算25 个大方格内的精子数）×10（等于1立方毫米内的精子数）×1000（等于1ml 被检稀释精液样品内的精子数）×被检精液稀释倍数。

? 稀释倍数：

一般牛、羊为100或200倍；猪、马为10~20倍。

或数出5个大方格（每一大方格有16个小方格，共计80个小方格）中所含精子数。 1 ml 精液中的精子总数 = 5个大方格内的精子总数/80 ×10×400×200×1000 80为小方格数 10为计算室高度

400为计算室小方格总数 200为稀释倍数

1000即1毫升=1000立方毫米 3、光电比色计计算精子密度测定法

原理：精子密度越高，精液越浓，以至透光性越低。

（五）精子形态检查 1、精子畸形率

一般不会超过10~20%，对受精力影响不大。超过20%，不宜用作AI。 头部畸形、颈部畸形，中段畸形、主段畸形等。

原因：遗传、年龄、生成过程受到破坏，采精环节的影响。 2、精子顶体异常率

一般牛为5.9%；猪为2.3%，对受精力影响不大。 如精子顶体异常率超过14%（牛）；4.3%(猪)，受精力下降。

（六）精液的生物化学检查 1、精子耗氧量测定 2、精液果糖分解测定 3、美蓝褪色试验

美蓝是一种氧化还原剂，氧化呈蓝色，还原为无色。精子呼吸耗氧而还原为无色。 4、其它生化指标的测定

多种酶类大多贮存于精子头尾各部，精清中有限。膜破坏，酶进入精清。

（七）精子对环境变化的抵抗力检查 1、精子对酸碱滴定的抵抗力 2、精子对1%NaCl溶液的抵抗力 容忍偏高渗的能力 3、精子抗冷击试验

温差在20℃以上，10min，计死活精子。 4、精子抗温试验

46℃水浴，10min，存活时间。

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（八）精子存活时间和存活指数的测定

精子存活时间是指精子在一定外界环境条件下的总生存时间。

精液稀释后分成若干等份，置于一定的条件下保存，隔一定时间抽同类一份样品，37℃检查活力。 存活时间：由开始稀释检查时间至倒数第二次检查之间的间隔时间，加上最后一次与倒数第二次检查间隔时间的一半。

存活指数：每相邻前后两次检查的精子平均活力与其间隔时间的乘积相加的总和即为存活（生存）指数。

（存活指数是指精液内的精子平均存活时间，表示精液内精子活力下降的速度）

（九）精液的细菌学检查

用生理盐水将精液1:10、1:100；1:1000，以至1:10000倍稀释。

分别吸取0.2ml分别注入血清琼脂培养皿内，37℃,24h。各皿菌落数乘上稀释倍数，即为每毫升原精液的细菌数。（×5）

GB4143-84 解冻后的精液应无病原微生物；1000个菌落数/ml（上限）

第四节 精液的稀释

精液稀释是指采得的精液里，添加一定数量的、按特定配方配制的、适宜于精子存活并保持受精能力的溶液。

目的：增加精液容量；供给精子营养；延长其存活时间；有利于保存和运输。

一、精液的稀释

（一）稀释剂 主要扩大精液的容量。具有相同或相似的渗透压。

（二）营养剂 主要是提供营养，以补充精子在代射过程中消耗的能源。精子代谢是单纯的分解作用，而不能通过同化作用变为自身成分。

葡萄糖、果糖、乳糖等糖类以及奶制品、卵黄等。 （三）保护剂

1、缓冲物质 用以保持精液适当的pH值。

常用缓冲物质：柠檬酸钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠等。三羟甲基氨基甲烷(Tris)。 2、非电解质和弱电解质 具有降低精清中电解质浓度的作用。 非电解质各种糖类；弱电解质如甘氨酸等。

副性腺电离度高，猪、马副性腺分泌物多，离心去精清，再稀释。 3、防冷刺激物质 具有防止精子冷休克的作用。

精子内的缩醛磷脂融点高，低温下容易凝固，从而导致精子的代射不能正常进行而造成不可逆的冷休克死亡。

卵磷脂的融点低，在低温下不易冻结，进入精子体内后，可以替代缩醛磷脂保障代谢的正常进行，从而维护精子的生存。

4、抗冻物质 具有抗冷冻危害的作用。 一般常用的有甘油、二甲基亚砜（DMSO）、三羟甲基氨基甲烷(Tris) 5、抗菌物质 具有抗菌作用。精液和稀释液都有是营养丰富的物质。 常用青霉素、链霉素和氨苯磺胺等。

此外，有的稀释液含有明胶，对精子有一定保护作用；蜂蜜：糖类、维生素、还有抑菌成分。

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