动物生理学实验指导

1. 剪取心脏时切忌勿伤及静脉窦。

2．培养皿中的任氏液温度最好保持在30℃左右。

3．仪器必须接地良好，以克服干扰。如果按标准导联Ⅱ连接，出现干扰时，可将左前肢也与仪器的右前肢导联线连接起来，即可克服干扰。

【实验结果】

剪贴记录曲线，根据实验结果总结容积导体的导电规律。 【思考题】

1．将引导电极置于体表或体内任何部位，为什么均可记录到心脏的生物电活动？ 2．如果将心脏取出，结果又将如何？为什么？ 3．若在将心脏放回胸腔，此时又将如何变化？为什么？

4．如将心脏放置于培养皿的任氏液中浸泡，并通过培养皿中的任氏液能否引导记录 到心电变化？为什么？

【附】 任氏液的配制:

NaCI KCI CaCI2 NaHCO3 NaH2PO4 葡萄糖 蒸馏水 PH值 6.5g 0.14g 0.12g 0.2g 0.01g 2.0g 1000ml 7.2

- 21 -

实验5 牛蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备

【实验目的】

学习生理实验基本的组织分离技术；掌握制备坐骨神经-腓肠肌标本的方法。 【实验原理】

两栖类一些基本的生命活动和生理功能与恒温动物类似，但离体组织器官可存活较长时间，且所需的存活条件比较简单，若将蛙的神经-肌肉标本放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张一次，表明神经和肌肉产生了一次兴奋。在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋性和刺激与反应的关系以及肌肉收缩的特征等。制备坐骨神经-腓肠肌标本是生理学实验的一项基本操作技术。

【材料及设备】 牛蛙；任氏液；滤纸；普通剪刀；手术剪；眼科镊；金属探针；玻璃分

针；蛙板（或玻璃板）；蛙钉；细线；培养皿；滴管；锌铜弓（或电子刺激器）

【方法和步骤】

1．毁脑、脊髓： 见实验 4.4 方法和步骤 1。

2. 剥制脊柱-后肢标本： 用左手捏住蛙的脊柱（图5.1-1)，右手持粗剪刀在前肢腋窝处连同皮肤、腹肌、脊柱一并剪断，然后左手握住后肢，紧靠脊柱两侧将腹壁及内脏剪去（注意避开坐骨神经），并剪去肛门周围的皮肤，留下脊柱和后肢。

3．剥皮： （图5.1-2）一只手捏住脊柱

图5.1-1 剪断脊柱

的断端（注意不要捏住脊柱两侧的神经），另一只手捏住其皮肤的边缘，向下剥去全部后肢的皮肤。将标本放在干净的任氏液中。将手及使用过

图5.1-2 撕掉皮

的探针、剪刀全部冲洗干净。

- 22 -

4．分离两腿： 用镊子取出标本，将脊柱腹侧向上，左手的两个手指捏住脊柱断端的横突，另一手指将两后肢担起，形成一个平面。此时用粗剪刀沿正中线将脊柱盆骨分为两半（注意勿伤坐骨神经）。将一半后肢标本置任氏液中备用，另一半放在蛙板上进行下列操作。

5. 辨认主要肌肉： 如图6.1-3，蛙类的坐骨神经是由第7,8,9对脊神经从相对应的椎间孔穿出汇合而成，行走于尾椎骨的两侧，到尾端（肛门处）绕过坐骨联合，到达后肢背侧，行走于梨状肌下的股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟内，到达膝关节腘窝处分两支(胫神经和腓神经)进入腓肠

腹面观

背面观

肌。

6．游离坐骨神经和腓肠肌： 用

5.1-3 蛙后肢肌

蛙钉或左手的两个手指将标本绷直、固定。先在腹腔面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经，然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的肌肉缝内将坐骨神经与周边的结缔组织分离直到腘窝，但不要伤及神经，其分支待以后用手术剪剪断。用玻璃分针将腓肠肌与其下的结缔组织分离并在其跟腱处穿线、结扎。

7. 剪去其他不用的组织(操作从脊柱向小腿方向进行)：

(1)剪去多余的脊柱和肌肉： 将后肢标本腹面向上，将坐骨神经连同2-3节脊椎用粗剪刀从脊柱上剪下来。再将标本背面向上，用镊子轻轻提起脊椎，自上而下剪去支配腓肠肌以外的神经分支，直至腘窝（图5.1-4A)，并搭放在腓肠肌上。沿膝关节剪去股骨周围的肌

脊柱骨 股骨 骨二头肌 坐骨神经 坐骨神经 股骨 坐骨神经 半膜肌 脊柱骨 腓肠肌 腓神经 胫神经 A B C D 图5.1-4 分离坐骨神经-腓肠肌 肉，并将股骨刮净，用粗剪刀剪去股骨上端的1/3，制成坐骨神经-小腿的标本（图5.1-4B）。

- 23 -

(2)完成坐骨神经-腓肠肌标本: 将脊椎和坐骨神经从腓肠肌上取下，提起腓肠肌的结扎线剪断跟腱。用粗剪刀剪去膝关节以下部位，便制成了坐骨神经-腓肠肌标本（图5.1-4C)。

8．检验标本：用沾有任氏液的锌铜弓触及（或电刺激刺激）或用镊子夹持坐骨神经中枢端，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，说明标本的兴奋性良好。标本浸入盛有任氏液的培养皿中备用。

【注意事项】

1．避免血液污染标本，一旦污染不可水冲洗。防止压挤、牵拉损伤标本，不可用手及金属器械触碰神经干。

2．在操作过程中，应随时给神经和肌肉滴加任氏液，防止表面干燥，以免影响标本的兴奋性。

3．标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟，使标本兴奋性稳定，实验效果会较好。

【思考题】

1．用各种刺激检验标本兴奋性时，为什么要从中枢端开始？ 2. 为什么不可用水冲洗标本？

3. 为什么锌铜弓可以检测神经-肌肉的兴奋性？

- 24 -