细胞生物学的研究方法

第三章 细胞生物学的研究方法

一、填空题

1．透射电子显微镜由 、 、 、三部分所组成。

2.在酵母人工染色体制备过程中，要用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为 、并且用 进行观察和计数。

4.观察贴壁生长的培养动物细胞可用 ，而观察脱去细胞壁的植物细胞，则要用 。 5. 物质在紫外光照射下发出的荧光可分为 和 两种，其中 需要将被照射的物质进行染色。

6．用紫外光为光源照射物体比用可见光的分辨率要高，这是因为 。 7．通过 或 形成的细胞叫细胞株。

9.灭活的仙台病毒之所以能够诱导细胞融合，是因为 。

10. 相差显微镜与普通显微镜的不同是用 替代可变光阑，用 代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。

11．倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其 。

12．若用紫外光为光源，光学显微镜的最大分辨率为 ，透射电子显微镜的最大分辨率为 ，扫描电镜的分辨率为 。

13. 显微镜的分辨本领是指能够 能力，用 来表示。 14．高压电镜的电压在120kV以上，优点是： 、 。 16. 细胞培养的突出特点是：可在 。

18.贴壁生长的细胞有三个特点：① ；② ；③ 。

19. 用细胞培养法来研究生命活动规律的局限性是 。 20．超薄切片染色常采用 、 染色。 21．免疫细胞化学技术是用来定位细胞中的 物质。

22．电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。 23.电子染色是用 来增强电子的散射能力。

24．在光学显微镜下见到的结构称为 ，在电子显微镜下见到的结构称为 。 25．细菌质膜的多功能性主要表现在：具有 的呼吸作用，具有 的分泌作用，具有 的信号传导作用。

27.在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是 。 28．单克隆抗体技术是将 与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。 29. 可用 技术来研究质膜结构的不对称性。

31.动物细胞培养所用的合成培养基中除含多种 、 和 外，一般还需加入 。

32．用荧光显微镜观察细胞时，经吖啶橙染色的细胞中的DNA发 荧光，而RNA发 荧光。 33．适于观察活细胞的光学显微有 、 和 等。

34．分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。人眼为 ，普通光学显微镜为 ，透射电子显微镜为 ，扫描隧道显微镜为 ，扫描电子显微镜为 ，以紫外光为光源的光学显微镜为 。 35. 细胞内不同组分分级分离的常用方法有离心法、层析法、电泳法等。离心技术可将细胞匀浆中的不同细胞器或生物大分子进行有效分离。因为不同形态、大小和密度的细胞器以及步弓分子质量的生物大分子在离心力作用下 各不相同。离心分离法又分 和 两种。 离心是一种较为简便的分离法，常用于细胞核和 的分离。因为在密度均一的介质中，颗粒越大沉降越 ，反之则沉降较 。这种离心方法只能将那些大小有显著差异的组分分开，而且所获得的分离组分往往不是很纯。而 离心则是较为精细的分离手段，这种离心方法的关键是先在离心管中制备出 或 等介质的浓度梯度并将细胞匀浆装在最上层。 二、判断题

1．透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。 2．扫描隧道显微镜是具有原子显像力的显微镜。

3. 在等密度梯度离心中蔗糖或甘油的梯度的作用与移动区带离心中梯度原理是不同的，在移动区带离心中梯度的惟一目的是减少样品的扩散，即使是在离心管的底部，颗粒的密度也比介质大。相反，在等密度梯度离心中，使用的密度足以阻止颗粒移动的密度，当颗粒达到与本身密度相同的密度区时就会停留在该区域。

4. 以蔗糖为介质的密度梯度离心又叫差速密度梯度离心。 5．CsCl密度梯度离心又称等密度梯度离心。

6．CsCl密度梯度离心法分离纯化样品时，样品要和CsCl混匀后分装。离心时，样品中不同组分因重力的不同而停留在不同区带。

7．提高显微镜的分辨率，可通过缩短波长，或给标本染色。

8．在光学显微镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构，在电子显微镜下观察到的结构称为超显微结构。 9．为了使光学显微镜或电子显微镜标本的反差增大，可用化学染料对标本进行染色。 11．贴壁生长的细胞呈单层生长，且有接触抑制现象。 12.癌细胞的培养，也是单层生长，但没有接触抑制现象。

13．生物样品的电镜分辨率通常是超薄切片厚度的1/10，因而切得越薄，照片中反差也越强。 14．用Triton等去垢剂可以抽提细胞中的微管、微丝等蛋白质结构。 15．淋巴细胞在体外培养时是以贴壁的方式进行生长。 16.相差显微镜可用来观察活细胞和未经染色的标本。

17．细胞匀浆离心时，较小的细胞器经受较小的摩擦，因而比更大的细胞器更快沉淀。 三、选择题

1．通过选择法或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群体称作（ ）

A．细胞系 B．细胞株 C．细胞库 D．其他 2．观察活细胞的显微结构时，最好用（ ）

A．荧光显微镜 B．相差显微镜 C．扫描电镜 D．透射电镜 3. 研究DNA在细胞中的代谢，常用的同位素标记物有 ( )。 A.14C-戊糖 B.32P-磷酸 C.15N-鸟嘌呤 D.3H-胸腺嘧啶

4.在细胞培养的研究中，已知细胞培养液与未知细胞培养液的主要区别是 ( )。 A.未知培养液是细胞培养研究中最近才发展起来的技术 B.未知培养液完全是人工制造的

C.已知培养液包括血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体 D.已知培养液不含血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体 5、使用氯化钯密度梯度离心法，其目的是（ ） A、通过密度梯度来维持重力的稳定性，防止物质对流 B、用来分离生物分子和细胞亚显微结构 C、防止生物大分子凝聚沉淀 D、以上都不对

细胞融合是一个复杂的过程，在此过程中（ ）

A、PEG可以诱导融合 B、用活的仙台病毒可以促进融合 C、不会形成异核体 D、只有同类细胞才能融合 6、提高一般光学显微镜的分辨能力，常用的方法有（ ）

A、利用高折射率的介质（如甘油） B、调节聚光器，加红色滤光片 C、用荧光抗体示踪 D、将标本染色 7、细胞融合的诱导剂主要有（ ）

A、PEG（聚乙二醇） B、TMV（烟草花叶病毒） C、亚硝酸 D、PHV（植物凝集素） 8、流式细胞仪或流式细胞分选仪能快速测定细胞的下列哪些参数（ ） A、DNA含量 B、RNA含量 C、蛋白质含量 D、细胞体积 9、在包埋-去包埋超薄切片电镜技术中，（ ）不正确 A、不用重金属染色 B、分辨率高

C、没有包埋剂存在 D、要用Triton去包埋 10、下列最不可能成为原代细胞培养的细胞来源是（ ）

A、胚胎组织 B、活跃生长的恶性肿瘤组织 C、成年鼠脑组织 D、植物原生质体

11、单个植物细胞在体外经过诱导并培养成为完整小植株的实验证明了（ ） A、细胞是构成有机体的基本单位 B、一切有机体均来自于细胞 C、细胞是有机体生长发育的基础 D、细胞具有遗传的全能性

12、光学显微镜有一个放大率为40的物镜和放大倍数为10的目镜，成像的总放大倍数是（ A、40× B、50× C、400× D、450× 13、下列哪项与显微镜能达到的分辨率无关？

） A、光波波长 B、物镜的放大倍数 C、标本和透镜之间的物质的折射率 D、透镜的数值孔径 14、基因枪是（）

A、一种将DNA包被片打入细胞的枪

B、用“闪电速度”的酶来合成重组DNA的新技术 C、一种利用重组DNA技术制造的用于战争的大杀伤性武器 D、以上都不对

15、在下列哪种情况下，物体在显微镜下的能见性最差（ ） A、物体与介质有同样的折射 B、物体和背景屈光不同 C、物体衍射了部分但非全部的射在它上面的光线 D、物体吸收了部分但非全部的射在它上面的光线 16、关于共聚焦激光扫描显微镜，下列哪项叙述有误？

A、以单色光激光作为光源 B、激光变成点光源后聚焦到标本成为点照明 C、图像信息要经过电脑三维重建处理 D、所有标本须经超薄切片

17、分别使用光镜的低倍镜和高倍镜观察同一细胞标本相，可发现在低倍镜下（ ） A、相较小、视野较暗 B、相较小、视野较亮 C、相较大、视野较暗 D、相较大、视野较亮

18、现有匀浆的和已经经过各级离心的鼠肝细胞溶液，下列哪一组分含有的线粒体最少？ A、进行离心之前的整个匀浆溶液 B、第一次低速离心后的上清液 C、经过高速超速离心后的上清液 D、以上的任何组分都没有线粒体 19、为什么透射电镜的照片没有颜色？

A、细胞内部结构无颜色，都为灰白色的暗影 B、彩色显微照片太昂贵了 C、彩色胶片尚未发明

D、照相的底片接受的是穿过样品的电子，而不是决定了颜色的各种波长的光

20、在电镜下面发现了一种新的细胞器，但却不能肯定是真的还是技术问题造成的人为现象，下列哪一项可证实推测？

A、在若干个相同来源的相同制备样品中找这一结构 B、在若干个不同来源的相同制备样品中找这一结构 C、在不同染色方法制备样品中找相同结构 D、在不同的（或无）固定剂条件下制备的样品中找相同结构

21、氚的半衰期为12年，那么保存了24年的氚的放射性是最初的（ ） A、12％ B、25％ C、75％ D、已不存在 22光镜与电镜比较，下列各项中（ ）是不正确的。

A、电镜用的是电子束，而不是可见光 B、电镜样品要在真空中观察，而不是暴露在空气中 C、电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色 D、用于电镜的标本要彻底脱水，光镜则不必 23、在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是（ ） A、核糖体 B、线粒体

C、未破碎的细胞核 D、微体 24、提高显微镜的分辨率的最好的方法是（ ） A、增加放大倍数 B、缩短波长 C、增加波长 D、给标本染色 25人胚肺成纤维体外培养大约能传代（ ）

A、20次左右 B、150次左右 C、40~60次 D、无数次 26在细胞分级抽提方法中，为了溶解膜系统，应选用（ ） A、Triton X-100 B、Tween 40 C、脱氧胆酸钠 D、0.25mol/L硫酸钠

27假设你对重建生活细胞的有丝分裂过程中染色体的三维形态感兴趣，你将选择哪种显微技术？ A、冰冻-断裂显微术 B、共聚焦扫描术 C、光学显微术 D、扫描电子显微术 28在动物细胞培养过程中要用（ ）来进行观察

A、相差显微镜 B、荧光显微镜 C、倒置显微镜 D、普通光学显微镜 29关于放射自显影技术，下列哪项错误？

A、利用放射性同位素探测细胞内生物大分子动态变化的一种方法 B、包括宏观自显影、光镜自显影和电镜自显影等三种类型 C、具有灵敏度高和操作简便、无污染等优点

D、自显影时常用的感光材料，包括X射线胶片和原子核乳胶等

30人眼的分辨率为10nm，光学显微镜的分辨力能使人眼的分辨力提高（ ） A、100倍 B、500倍 C、1000倍 D、5000倍 四 简答题

1.电子显微镜为何不能观察活标本? 2.比较放大率和分辨率。 六．问答题

1.何谓原代培养，细胞株和细胞系 2.说明电子显微镜和光学显微镜的主要差别 七．名词释义 1.显微分辨率: 2.细胞培养: 3.显微结构: 4.超微结构:

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