抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建筛选及鉴定

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抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建\\筛选及鉴定

作者：李铁军 李德全

来源：《湖北农业科学》2011年第09期

摘要：以速灭威抗原免疫的小鼠为实验对象，取其脾细胞，ＲＴ－ＰＣＲ扩增抗体重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ）基因，重叠延伸ＰＣＲ拼接单链抗体（ＳｃＦｖ）基因，克隆入噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ并转化大肠杆菌ＴＧ１，成功构建了库容约７．６×１０５的抗速灭威噬菌体ScFv库。对该文库进行了５轮“吸附-洗脱-扩增”的富集筛选，获得了６个特异性较强的抗速灭威噬菌体ＳｃＦｖ阳性克隆。其研究结果为速灭威特异性抗体的大量制备奠定了一定的基础。

关键词：速灭威；单链抗体；噬菌体展示

中图分类号：Ｑ８１９ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1908-05

Construction，Screening and Identification of Phage ScFv Library Against Metolcarb

ＬＩ Ｔｉｅ－ｊｕｎ１，ＬＩ Ｄｅ－ｑｕａｎ２

（１． Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｔｏｎｇ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｔｏｎｇ ２２６００７，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｎａｎｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ ２２６００７，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｂａｌｂ／Ｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｈａｐｔｅｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｏｆ Ｍｅｔｏｌｃａｒｂ， ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ． ＶＨ ａｎｄ ＶＬ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ． ＶＨ ａｎｄ ＶＬ ｗｅｒｅ matched into ScFc by overlap extension PCR， ａｎｄ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ ｅｘｐｒｅｓｓ