蛋白质的定量分析方法

蛋白质定量的一般注意事项：

1. 采用同标准曲线比较的方法只能用来确定与标准蛋白浓度相近、性质类似的蛋白质样品；

2. 定量时一定要是样品浓度在标准曲线限行范围内； 3. 使用溶解蛋白质样品的溶液来溶解标准蛋白；

4. 蛋白质电泳前精确定量目的：保证不同样品之间的可比性以及电泳所适合的上样量；

5. 标准蛋白应尽量选择与所测定的大多数蛋白质性质更接近的蛋白质（例如：测定免疫球蛋白——IgG做标准；测定血清蛋白——BSA），常用的标准蛋白有γ球蛋白和BSA。

6. 蛋白质定量方法的选用(BCA法和Bradford法)

6.1 Bradford法特点：

a.灵敏度高（与Lowry法相比）；

b.测定快速简便，且只需加一种试剂（5分钟）； c.干扰物质少；

d.蛋白质中精氨酸和芳香族氨基酸含量不同，因此该方法用于不同蛋白质样品测定时有较大差异；

e.相关干扰物：去污剂、X-100、SDS、NaOH等； f.做标准曲线时 轻微非线性（0-1000ug/ml较好）。 6.2 BCA法特点： a.灵敏度高；

b.不受大部分样品中去污剂等的影响，可兼容5％SDS、5％X-100；5％ Tween20,60,80；

c.20-2000ug/ml有良好的线性关系；

d.检测不同蛋白质分子的变异系数还远小于Bradford法；

e.该方法收到螯合剂和略高浓度还原剂影响（EDTA小于10mM、DTT（或者巯基乙醇小于1mM）。