临床免疫学与检验重要知识点汇总考试复习重点知识总结

景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。 试述荧光免疫显微技术基本原理。

DA荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。 试述荧光免疫显微技术的临床应用。

DA临床常应用于：①血清中自身抗体的检测；②各种微生物的快速检查和鉴定；⑧寄生虫感染的诊断；④白细胞分化抗原的检测。

时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点?

DA时间分辨荧光免疫测定法具有特异性强，灵敏度高，标准曲线范围宽，分析速度快，标记物制备较简便、有效使用期长，无放射性污染等优点，因此是很有发展前途的超微量物质免疫分析技术。 目前临床检验中常用的荧光物质有哪些？

DA目前临床检验中常用的荧光物质有：四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异硫氰酸罗丹明、Eu3+的螯合物等。

简述荧光抗体的制备及纯化方法。DA荧光抗体的制备方法纯化方法有透析法、凝胶过滤法、有撑搅拌法及透析法。

荧光抗体技术有哪些优缺点，在临床上有哪些应用？

荧光抗体技术的优点：（1）能做到快速、敏感、定位。（2）Ag 和Ab 的特异性与形态的检查结合在一起；缺点：⑴对组织细胞进行微细结构的观察做不到；⑵标本不能永久保存，荧光有自然消退现象，需及时观察及对照相；⑶有非特异性荧光的干扰。荧光抗体技术的应用：⑴病毒学方面：病毒鉴定和病毒在感染cell内的定位；⑵寄生虫学方面：用于寄生虫的诊断（鉴定、分型）；⑶免疫学方面：研究、用于自身免疫病的诊断；⑷细菌学方面：菌种鉴定和Ag结构的研究。 用于标记的酶应符合哪些要求?

DA(1)酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3)酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。(4)酶活性不受样品中其他成分(内源性酶、抑制物)的影响；用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质稳定，且价廉易得。 简述酶免疫技术的分类。

DA(1)酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定，异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。 简述均相酶免疫测定的原理。

DA酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶(E)活性将减弱或增强。因此，不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算出被测样品中Ag的含量。 简述双抗体夹心法的原理。

DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。

斑点-ELISA有哪些优点?

DA(1)NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的EusA高6～8倍；(2)试剂用量较EusA省10倍；(3)操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件；(4)吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存(-20℃可达半年)。

简述ELISA的基本原理、方法类型及应用。

DA(1)基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。(2)方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上

抗原决定基的多价抗原；②间接法：用于检测抗体；③竞争法：用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定；④捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。 简述酶增强免疫测定技术的原理。

DA具抗原及酶活性的Ag-E与Ab结合形成AgAb后，所标的酶(E)因与Ab接触

紧密，空间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品

中的Ag)后，Ag即与Ab叫竞争结合反应系统中限量的Ab形成AgAb复合物，从而使反应液中AgAb*(酶活性被抑制)的比例减少，具酶活性的游离AgE增多。最终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原(Ag)浓度升高而增强。

简述免疫印迹法的原理。

免疫印迹法由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快；将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组分的分子量。

何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。

DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。 免疫溶血试验的原理和用途。

DA原理是补体能使已被抗体致敏了的红细胞发生溶血。免疫溶血试验所参与的成分有补体，抗原(SRBC)及抗体(溶血素)，这三种成分中如有两种是已知的就可测知第三个成分，稀释该成分可测定其效价或含量。如溶血素的滴定，溶血空斑试验，CH50试验，补体结合试验，抗补体试验等。 如何进行补体单个成分的测定?

DA补体单个成分可测其溶血活性或含量。测定溶血活性应先制备缺乏该补体单个成分的“补体试剂\。而后利用免疫溶血试验的原理，将致敏红细胞与“补体试剂”混合，再加入待测血清，孵育后，溶血程度与待测血清中的该补体成分的溶血功能有关。测定含量可用已知抗体以单向琼脂扩散等方法进行。 血清免疫球蛋白测定方法有那些？

答：单向免疫扩散法：原理，优点：简单，条件要求低，但抗体需要高效价高特异性，灵敏度： mg/ml 免疫比浊法:原理，优点：检测结果准确，精密度高，耗时短，灵敏度高ug/ml 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定有何意义？

答：IgG、IgA、IgM均升高则慢性疾病， IgG升高则多为细菌感染导致，新生儿血清IgM升高则常为 宫内感染。单一Ig显著升高则多为免疫增殖病：多发性骨髓瘤，重链病、恶性淋巴瘤。Ig降低则体液免疫缺陷或联合免疫缺陷。

某患者临床疑为细胞免疫功能缺陷，应做哪些检查以协助诊断？ 答：从以下几个方面检测1)皮肤试验 ，显示有迟发超敏反应能力，表示受试验者细胞免疫功能完善2)T细胞及其亚群检测，常采用荧光抗体检测T细胞表面标志分子CD3，CD4等 3)T细胞功能检测，利用PHA刺激淋巴细胞增殖，转化来判断T细胞的功能 简述原发性吞噬细胞缺陷病的发病机制主要包括哪几种？

主要包括：①吞噬细胞趋化和（或）粘附功能障碍。②吞噬和杀菌功能障碍。③单核吞噬细胞的特殊异常，如IgG Fc受体缺陷。

简述AIDS的主要免疫学特征？

①免疫系统的CD4T淋巴细胞受HIV感染，使CD4T细胞受损而减少。②单核-巨噬细胞、滤泡树突状细胞和朗格汉斯细胞亦可受HIV 感染而受损。③进行性细胞免疫缺陷，继而体液免疫缺陷。④B淋巴细胞可克隆激活伴免疫球蛋白增多。

简述体液免疫缺陷的检测方法？

有①血清Ig 的测定，常用免疫扩散法和免疫比浊法。②分泌型IgA 的测定，用单向免疫扩散或ELISA 等。③同种血细胞凝集素测定。④特异性抗体产生能力测定，疫苗接种后抗体产生的测定。⑤抗IgA抗体的测定，测自身抗体。⑥SmIg测定，检测B细胞数量和其成熟程简述细胞免疫缺陷的检测方法？

有①迟发性皮肤过敏反应试验，常为初筛试验。②T细胞及其亚群的检测，为主要的试验测定CD3、CD4、CD8 分化抗原进行分类鉴定。③E 玫瑰花结试验，现常用CD2 测定所代替。④淋巴细胞增殖反应试验，为体外免疫功能试验，方法有形态法和同位素法。⑤T细胞分泌产物功能测定，测定激活的T细胞和单个核细胞分泌的细胞因子。 简述IDD的共同临床特点？

.①对病原体的易感性强、常发生反复感染、严重感染，难以治愈。T细胞缺陷易发生病毒真菌和寄生虫感染。余缺陷病易发生细菌感染，尤以化脓感染为主。②易发生恶性肿瘤和并发自身免疫病。③临床表现和病理损伤有明显的多样性，症状各异，复杂多样，主要是累及多系统和多器官所致。

简述IDD的常见发病原因？①遗传基因异常，常表现为X 连锁隐性遗传和常染色体隐性遗传，显性遗传亦有，少见。②中枢免疫器官发育障碍，由遗传或其他原因所致。③免疫细胞内在酶的缺陷，如ADA、PNP、G-6-PD 缺乏所致。④免疫细胞间调控机制异常，辅助不足或抑制过剩均可导致免疫缺陷。 简述原发性B细胞缺陷病的主要免疫学和临床特征？

.本组疾病有三种主要免疫学和临床特征：①全部Ig 缺失或极度降低，如Bruton 综合征。②部分Ig缺失，如选择性Ig缺陷。③Ig量正常，但在抗原刺激后无免疫应答，功能缺陷。 叙述AIDS三大标志的主要免疫学检测？

AIDS 检测主要是病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志主要是直接分离培养检测病毒或检出HIV 组分，P24、gp120 和gp160 的免疫印迹检测；免疫标志主要是检测HIV的抗原或抗体及T细胞，HIV抗体用ELISA测定为初筛试验，确认试验用免疫印迹法，亦可用PCR法。我国判定标准为：①HIV抗体阳性：至少有两条膜（gp41/gp120/gp160）或至少有一条膜带与P24 带同时测定；②HIV 抗体阴性：无HIV 抗体特异性条带出现；③HIV 抗体可疑：出现特异性抗体带，但带型不足以确认阳性者，T 细胞检测减少，常＜1.5×109/L。CD4+T细胞绝对值下降至（2~4）×109/L，CD4/CD8比值＜1，还有Ig、免疫复合物等测定；④相关标志是指与HIV感染、AIDS病情有关的检测，如有关微生物检测、白细胞、ESR等。 叙述AIDS的主要发病机制？

AIDS 的主要发病机制：HIV 感染后，主要是损伤CD4+T 细胞减少和功能缺陷而导致机体细胞免疫功能继而体液免疫功能全面障碍为其主要的发病机制。同时还损伤巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和脑组织小胶质细胞，导致相应的功能障碍。HIV损伤T细胞是通过HIV外膜蛋白gp120 和gp41 与T细胞发生拈附、溶解、使病毒核心进入靶细胞，在靶细胞内进行复制，繁殖，最后以芽生方式破坏细胞膜而移出，进行感染扩散，从而破坏CD4+T细胞，导致免疫缺陷。 论述流式细胞术在免疫学中的应用。

1.淋巴细胞及其亚型的分析2.淋巴细胞功能的分析3.淋巴造血系统及白血病免疫分型4.肿瘤耐药基因分析5.AIDS检测中的应用6.自身免疫病相关HLA分析7.移值免疫中的应用 何谓重链病？

重链病是由于浆细胞发生突变和异常增生，致使血清和尿中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致的疾病。 何谓轻链病？

轻链病是突变的单克隆浆细胞产生的大量轻链，血浆中轻链含量异常增加，增加的轻链从肾脏排泄，血和尿中可查及大量的轻链蛋白。 何谓免疫球蛋白异常增生性疾病？

免疫球蛋白异常增生性疾病是指由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白异常增生造成机体病理损伤的一组疾病。

何谓浆细胞异常增殖？

浆细胞异常增殖通常是指单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。 何谓ANA，简述荧光免疫组化法(间接法)检测血清总ANA的原理。

ANA即抗核抗体 ，指各种成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体，可与不同的细胞核反应，无器官特异性和种属特异性 间接法检测ANA原理：用小鼠肝切片或印片或HEP2细胞作为细胞核基质抗原，加待测血清，若含有ANA，则与细胞核基质抗原反应，再加荧光素标记的抗抗体(二抗)，结合一抗，在荧光显微镜下见到细胞核有荧光着色为阳性反应。

ANA有哪些种类，它们在SLE诊断中的价值如何？

答：抗核抗体是一种广泛存在的自身抗体，主要包括，抗DNP抗体，抗DNA抗体， 抗ENA抗体，抗组蛋白抗体。约99%（86%～100%）的活动期SLE病人ANA阳性，ANA阴性几乎可除外SLE的诊断。 你知道哪些自身抗体，临床应用价值如何？

答：1）ANA：在未经治疗的SLE患者中阳性率可达90%以上，其他自身免疫病也可阳性。可作为自身免疫病，尤其是SLE的筛选指标。2）抗Sm抗体：SLE的特征性标志抗体，是SLE重要诊断指标。3）抗dsDNA抗体： SLE的特征性标志抗体，是SLE重要诊断指 试述自身免疫病的防治原则。

答：自身免疫病的防治原则大致为：（1）预防和控制病原体的感染，避免因自身组织细胞的抗原性发生改变和交叉抗原诱发的免疫应答，同时也避免感染引起的抗原提呈细胞和T细胞的激活。（2）使用免疫抑制剂如环孢霉素A、FK-506、皮质激素、中药雷公藤治疗主要以抗体引起的自身免疫病，用Th2因子治疗主要以T细胞引起的身身免疫病。（3）特异性抗体治疗，如用抗CD3单抗，抗炎症性细胞因子单抗等。（4）疫苗激发免疫耐受。如口服II型胶原等自身预防和治疗类风温关节炎等 试述系统性红斑狼疮，自身抗体的检测。

答：疾病诊断相关的主要自身抗体:1．抗核抗体2．抗DNA抗体3．抗磷脂抗体和抗血小板抗体4．抗红细胞抗体5．RF 6．抗细胞质抗体 自身免疫病的共同特征。

1.多数病因不明；2.有遗传倾向；3.患者以女性居多，并随年龄增加发病率有所增加；4.患者血清中游多种自身抗体或自身反应致敏淋巴细胞存在；5.疾病有重叠现象；6.病程一般较长，多迁延为慢性；7.病损局部可发现淋巴细胞，浆细胞，中性粒细胞等浸润；8.免疫抑制剂治疗可取的一定疗效。 简单叙述Ⅰ型超敏反应的特点。

答:Ⅰ型超敏反应的特点是： ①具有明显的个体差异和遗传背景；②反应发生快， 几秒至几十分钟内出现症状， 恢复也较迅速；③由结合在肥大细胞和嗜碱粒细胞上的IgE抗体所介导；④通常反应发生后效应器官出现功能紊乱， 而没有严重的组织细胞损伤；⑤补体不参与该反应。 I型超敏反应的免疫学检验方法有哪些？

1）皮试检测变应原。2）免疫球蛋白检测：总IgE和 特异性IgE。3）嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞检测。

以血型不合引起的输血反应为例，简述Ⅱ型超敏反应靶细胞损伤机制。

答：抗ABO血型抗体多为IgM型(1分)，当血型不合进行输血时，血型抗体可与红细胞表面相应的血型抗原物质结合(1分)，通过三个机制溶解红细胞：抗体和补体介导的红细胞溶解(2分)，免疫调理作用(1分)，ADCC作用

试述III型超敏反应发生机制。

答：III型超敏反应，IC沉积引起组织损伤的机制如下：（1）激活补体 IC沉积可激活补体，产生C3a、C5a等过敏毒素，使趋化至局部的肥大细胞、嗜碱粒细胞脱颗粒，释放组胺等活性介质，造成血管通透性增加、渗出和局部水肿。同时吸引中性粒细胞聚集于IC沉积的部位。（2）中性粒细胞浸润 趋化至IC沉积部位的中性粒细胞在吞噬IC时释放多种溶酶体酶，使血管基底膜和周围组织细胞民生损伤，造成以上中性细胞浸润为主的炎症。（3）血小板活化 IC和C3b可使血小板在局部聚集并活化，释放血管活性胺类物质，使血管扩张、通盘性增加、加剧局部渗出和水肿，并激活凝血系统，形成微血栓，造成局部组织缺血、出血和坏死。

Rh血型不符引起的新生儿溶血症属于哪一种类型的超敏反应性疾病?

试述其发生机制。答:（1） Rh血型不符引起的新生儿溶血症为型Ⅱ超敏反应性疾病。（2）Rh血型不符引起的新生儿溶血症发生于Rh一母亲所怀的Rh＋胎儿，尤其多见于再次妊娠所分娩的新生儿。当首次妊娠分娩时，胎儿的Rh＋红细胞可进入母体，剌激母体产生抗Rh抗体。当再次妊娠仍为Rh＋胎儿时，母体产生的抗Rh抗体(IgG)即可通过胎盘进入胎儿体内， 与胎儿Rh＋红细胞结合，导致胎儿红细胞的破坏。从而引起流产或出生后的严重溶血现象，甚至死亡。 试述Ⅰ型超敏反应的发生机制

答：Ⅰ型超敏反应的发生机制：Ⅰ型超敏反应是由于变应原再次进入体内后引发的超敏反应，其发生通常分三个阶段：（1）致敏阶段 在此阶段，变应原进入机体，刺激机体特异的B淋巴细胞，使其增殖分化为浆细胞，浆细胞分泌产生针对特异变应原的IgE抗体，此抗体吸附于肥大细胞和嗜碱性粒细胞上，使机体处于致敏状态。（2）发敏阶段 当有相同变应原再次进入机体时，与致敏靶细胞表面的IgE Fab