BD FACSAria 流式细胞分选仪

1. 开机程序

（1） 开启稳压电源，启动计算机，在出现的登陆对话框中，输入用户名和密码，点击“OK”。 （2） 开启仪器电源，打开所需激光电源。若仪器刚关闭，需等到仪器系统压力完全消除

后，再开启主电源。

（3） 运行BD FACSDiva Software软件，双击桌面上的快捷方式。在出现的登陆对话框中，无需输入用户名和密码，直接点击“OK”。

（4） 仪器自动联机，在“Cytometer仪器框”中确认软件已经和仪器相连接即“Cytometer Connected”；检查此窗口底部的液流系统水平，如果需要，则充满液体或清空废液。 （5） 在FACSDiva软件的“Cytometer”菜单中，选择“Fluidics Startup”选项。按窗口提

示步骤进行操作。

（6） 将气路和液路从乙醇关机液桶断开，连接到鞘液桶相对应的接口上，点击done。 （7） 确认装有O圈的闭合喷嘴在流动检测池上，点击done。 （8） 取下闭合喷嘴，点击done。

（9） 安装合适口径的喷嘴，保证O圈正确装入喷嘴。

（10） 单击OK完成此过程。

（11） 液流启动完成后，在“Sort”菜单中选择“Sort Setup”选项，确认设置模式与喷嘴的口径相匹配。

（12） 开启液流。

（13） 打开流动检测池上盖，打开分选区门，检查位于废液吸引器中的液流的位置，并检

查断点液流窗口中的液流情况。液流应顺利由喷嘴流入废液吸引器的中央。液滴应该表现大小均匀，且以一定的距离相隔排列。如果发现有液滴滴洒、不稳定或者任

何液流异常现象，关闭液流，重新检查液流情况。

（14） 关闭分选区门和流动检测池上盖。 2. 关机程序

（1） 关闭液流。

（2） 检查废液桶是否已满、乙醇关机桶是否需要补液。 （3） 从流动检测池取下喷嘴。

（4） 安装好闭合喷嘴，确定O圈在喷嘴上。

（5） 在“Cytometer”菜单下选择“Cleaning Modes/Clean Flow Cell”选项。

（6） 在进样管中装入约2ml FACSClean solution 或0.5%NaClO溶液，放于载物台上，点击OK。

（7） 当出现完成对话框时，点击OK。

（8） 在进样管中装入约2ml去离子水，重复5-7步。

（9） 在“Cytometer”菜单下选择“Fluidics Shutdown”选项。 （10） 从流动检测池取下喷嘴，点击done。

（11） 安装好闭合喷嘴，确认O圈在喷嘴上，点击done。 （12） 将液路和气路连接到乙醇关机液桶上，点击done。

（13） 在进样管中装入约2ml去离子水，放于载物台上，然后点击done。 （14） 当您看到“系统可以安全关闭”的信息时，点击OK。 （15） 关闭激光器电源，关闭仪器主电源。

（16） 退出BD FACSDiva软件，并关闭计算机和稳压电源。

（17） 拉开鞘液桶压力阀，完全释放压力。

3. Rainbow beads 演示质控和Diva软件操作练习

（1） 样本制备：向1ml鞘液中加入2滴混合均匀的Rainbow荧光微球。

（2） 打开FACSDiva软件。

（3） 在“浏览器”里建文件夹（QC）和实验组（bead），样本（日期），1采集管（Rainbow），

并重命名（选中后，点右键Rename）。将“通用工具页面（Global sheet）”命名为Rainbow。

（4） 将“浏览器”的采集箭头选中采集管，所有参数均选择线性，所有参数均选择A面积信号，FSC和FITC、APC、Violetl还要选择H高度信号。

（5） 在“通用工作页面Rainbow”上建获取模板：

A， 第一个图形为双参数FSC/SSC散点图，其余图形为单参数直方图。选中工作页面

工具栏中的绘图工具，在空白页面上单击，即出现相应图形，再调整大小。 B， 第一个图，横轴FSC-A。纵轴SSC-A，在横轴和纵轴均100000左右位置，设单个

微球的矩形门P1。

C， 点击Ctrl，一起选中其余直方图，点击右键，选择“Show Population”中的P1，

即其余直方图仅显示P1门内微球颗粒；右键单击任何一张图，选择“Show Population Hierarchy”，出现该图，以明确层层包含的细胞归属级别。 D， 直方图的横轴分别为FSC-A，FSC-HFITC-A,FITC-H;APC-A,APC-H;Violetl-A,Violetl-H;SSC-A,PE-A,PE-TexRed-A,PerCP

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