高效液相色谱原理 - 图文

原因是防止不溶物堵塞流路或色谱柱。

方法是用0.45μL以下微孔滤膜（有机溶剂或水）过滤。 B. 脱气：

原因是溶解有氧气或混入了空气而形成气泡，会使色谱图上出现尖锐的噪声峰；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，致使基线起伏。

方法有超声波震荡脱气、惰性气体鼓泡吹扫脱气、在线（真空）脱气。目前广泛使用的是超声波震荡脱气。其方法是将配好的流动相连同容器一起放入超声波水槽中脱气10~20min。 （3） 高压输液系统

高压输液系统一般包括贮液器、高压输液泵、梯度洗脱装置等。

A. 储液器：由玻璃、不锈钢或特种塑料制成。 B. 高压输液泵：是高效液相色谱仪的关键部件。

其作用是将流动相以稳定的流速或压力送到色谱分离系统。 要求是压力平稳无脉动，流速稳定，流量可调节，泵体材料耐化学腐蚀，死体积小，一般要求有25~40MPa。

一般分为恒流泵★和恒压泵。目前使用较多的是第一种。 C. 过滤器：装置在高压输液泵的进口和它的出口与进样阀之间。 作用是防止微小的杂质进入流动相，导致活塞或阀芯损坏，不能正常工作。

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D. 梯度洗脱装置★：是指流动相梯度。即指分离过程中改变流动相的组成（溶剂极性、离子强度、pH 等）或改变流动相的浓度。 依据梯度装置所能提供的流路个数可分为：★二元梯度、三元梯度等。

依据混合的方式不同可分为：高压梯度和低压梯度。 梯度洗脱技术可改进复杂样品的分离，改善峰形，减少拖尾并缩短分析时间。提高分离精度，降低最小检测限。

特别是保留值相差较大的混合物的分离是极为重要的手段。

（4） 进样系统：将样品溶液准确送入色谱柱的装置。

要求是密封性好、死体积小、重复性好，进样引起色谱分离系统的压力和流量波动要很小。

进样器的作用是将样品溶液准确送入色谱柱上进行分离。 常用的进样器有以下两种。

1）六通阀进样器 六通阀进样器的工作原理与气相色谱中的六通阀进样相似，进样体积由定量管确定，规格为10μL和20μL，结构如图7-17所示。

（a）取样 （b）进样

图7-17 高效液相色谱仪六通阀进样器

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2）自动进样器

自动进样器是由计算机自动控制定量阀，按预先编制的注射样品操作程序进行工作。取样、进样、复位、样品管路清洗和样品盘的转动，全部按预定程序自动进行，一次可进行几十个或上百个样品的分析。但此装置一次性投资很高，目前在国内尚未得到广泛应用。

进样器是六通阀进样器。耐高压、重复性好、操作方便的特点。

（5） 色谱柱★

液相色谱仪常用的色谱柱一般采用内壁抛光的不锈钢或塑料柱管。

标准的填充柱内径为4.6mm或3.9mm，柱子的长度一般为10～50cm，柱子的形

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状一般采用直形柱，具有较高的柱效，易于在填充时保证填充均匀，装柱与换柱都比较方便。

此外，色谱柱在装填料之前是没有方向性的，但填充完毕的色谱柱是有方向的，即流动的方向应与柱的填充方向(装柱时填充液的流向)一致。色谱柱的管外都以箭头显著地标了该柱的使用方向(而不像气相色谱那样，色谱柱两头标明接检测器或进样器)，安装和换色谱柱时一定要使流动相能按箭头所指方向流动。

★是整个色谱仪的心脏。要求耐高压、流动相和样品的腐蚀。一般用不锈钢制成。

色谱柱一般为直柱。柱内径一般为2~5mm，柱长为15~50cm。 ★预柱（保护柱）的作用是保护延长分析柱的寿命。可以挡住流动相中的细小颗粒，以阻止其堵塞色谱柱。可更换。

★ 恒温装置的作用是由于温度的微小波动可导致基线的起伏。 色谱柱在装料前没有方向性。

色谱柱在装料后就有方向性了。即流动相的方向与柱的填充方向（装柱时填充液的方向）一致。安装或更换时要按照箭头方向操作。

装柱是一项技巧性很强的工作，对分离效果影响很大。 有干法和湿法。

（6） 检测器：连续监测被色谱分离后的柱流出物组成和含量的

装置。

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