高效液相色谱原理 - 图文

高效液相色谱法（HPLC） 一、 方法原理 1、液相色谱法概述 高效液相色谱分析法

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其工作流程为：高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导人，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理和保存。

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HPLC仪器的基本结构

2、高效液相色谱法的特点（HPLC）

与经典柱色谱原理相同，是由液体流动相将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分

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配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异来进行分离。

由于高压输液泵、高灵敏度检测器和高效固定相的使用，提高了柱效率，降低了检出限，缩短了分析时间。

特点是选择性高、分离效能高、分析速度快的特点。 高沸点有机物的分析、离子型化合物、高分子化合物、热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱法的不足。

高效液相色谱法与气相色谱法相比，各有所长，互相补充。 如果能用气相色谱法分析的样品，一般不用液相色谱法，因为气相色谱法分析速度更快、更方便、成本更低。 3、高效液相色谱法的固定相和流动相 （1）固定相

表面多孔型和全多孔型两大类。

（2）流动相（淋洗液）

流动相的选择对改善分离效果产生重要的辅助效应。 从实用，选用的流动相具有廉价、易购的特点外，还应满足下列要求：

① ② ③ ④ ⑤

与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。 高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。

与所用的检测器相匹配。

应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。

具有低的黏度（可减少溶质的传质阻力，提高柱效）和适当低的沸点。

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