菌种鉴定

徐州工程学院毕业设计(论文)

有些细菌除具共同结构外还有鞭毛、荚膜、芽孢等特殊结构[5]。

1.4 窑湾甜油细菌菌群分析的意义

由于食用甜油的人很少是高血压患者和癌症患者，且证实常年食用甜油的人高寿、血压正常，很少有脱发、早白发现象。它的鲜美度是味精的10倍。加入甜油的凉菜、生鱼虾等，味道十分鲜美。 窑湾甜油可称得上是保健食品,中医还认为，甜油入肾经，可滋阴养肾、增强人体免疫力，有健胃、美容的作用。可见生产甜油过程中，我们大胆的推测，所使用到的细菌可产生对人体有益的物质。所以我们从窑湾古镇取来窑湾甜油面菌块进行研究，主要是对各种细菌进行筛选鉴定[6,7]。在生产甜油时使用的小麦熟面块经发酵后，腐败微生物极易在其中生长繁，所以其中含有的微生物比较多，我们主要目的就是从中筛出有益于人类身体健康的菌种，为以后用于工业化生产提更依据。

4

徐州工程学院毕业设计(论文)

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

2.1.1 样品来源

采取窑湾甜油面菌块为原材料，用无菌样品袋带回实验室备用。

2.1.2 菌种分离和筛选有关培养基

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，琼脂2g，，蒸馏水100mL，pH 7.0～7.2，灭菌1.05kg/cm2，22min。

淀粉水解培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，可溶性淀0.2g，水100mL，pH 7.0～7.2，琼脂2g，灭菌1.05kg/cm2，20min。

糖蛋白胨水培养基：葡萄糖0.5g，蛋白胨0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL，pH 7.2-7.4。 葡萄糖发酵培养基:蛋白胨2.7克,氯化钠 5.0 g，0.2%溴麝香酚兰0.03 g，琼脂3 g，KH2PO4 0.3 g，葡萄糖10.0 g，水1000mL。

蛋白胨水培养基：蛋白胨1 g，氯化钠 0.5 g，水加至 100 mL，pH调至7.8。

5

徐州工程学院毕业设计(论文)

2.1.3 主要试剂

表2-1 主要试剂

主要试剂 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂粉 异戊醇 苯酚 无水乙醇 磷酸二氢钠 磷酸氢二钠 硫酸铵 冰乙酸 硫酸镁 硝酸钾 硫酸亚铁 无水氯化钙 葡萄糖 氯仿 EB

细菌基因组DNA快速抽提试剂盒

Taq酶 超纯dNTP DH5α Competent Cell pUC-T Ligasing Kit

SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒 Axyprep质粒DNA小量试剂盒

生产厂家、 宜兴永信生物有限公司 天津市科密欧化学试剂有限公司 上海申翔化学试剂有限公司 福建省石狮市前坑琼脂加工厂

江苏徐州腾狮化工厂 汕头市西陇化工厂有限公司 江苏徐州腾狮化工厂 上海申翔化学试剂有限公司 上海申翔化学试剂有限公司 天津市瑞金化学试剂有限公司 上海苏懿化学试剂有限公司 天津市福晨化学试剂厂 天津市凯通化学试剂有限公司 天津市福晨化学试剂厂 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津市北方天医化学试剂厂 天津市福晨试剂有限公司 上海申翔化学试剂有限公司 生工生物工程（上海）有限公司

北京康为世纪有限公司 北京康为世纪有限公司 北京康为世纪有限公司 北京康为世纪有限公司 生工生物工程（上海）有限公司 爱思进生物技术(杭州)有限公司

6

徐州工程学院毕业设计(论文)

2.1.4 主要仪器与设备

表2-2 主要仪器

主要仪器与设备

三角瓶 90mm平板 烧杯 移液枪 接种针 涂布棒 玻璃棒 量筒 试管 试管塞 酒精灯 纱布 无菌棉 电炉 电子天平 电磁炉 数显恒温水浴锅

灭菌锅 恒温培养箱 DL-5低速大容量离心机 GZX-DH﹒600-Ⅱ电热恒温干燥箱

冰箱 无菌操作台 DYCZ-24D电泳槽 DYY-12型电泳仪 HJ-3数显恒温磁力搅拌器

pH-3C精密pH计

生产厂家 实验室自备 上海五一玻璃仪器厂

实验室自备 大龙医疗设备有限公司

实验室自备 实验室自备 实验室自备 实验室自备 实验室自备 实验室自备 实验室自备 徐州卫生材料厂有限公司 徐州卫生材料厂有限公司 上海树立仪器仪表有限公司 上海越平科学仪器有限公司

美的有限公司 上海梅香仪器有限公司 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 上海精博设备实验有限公司 上海安亭科学仪器厂 上海跃进医疗器械厂 海尔有限公司 苏州净化设备厂 北京市六一仪器厂 北京市六一仪器厂

江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司

上海雷磁仪器厂

7