药物残留

动物性食品中喹诺酮类药物 残留检测方法的研究进展

摘要: 喹诺酮类药物广泛的应用于治疗人和动物的感染性疾病，主要的作用机理是抑制DNA拓扑酶Ⅱ。此类药物抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强，而且价格低廉，因此已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一。由于喹诺酮类药物广泛用于可食性动物，其残留可导致人体内病原体的耐药性，所以欧盟和食品添加剂联合专家委员会 早就规定了几种喹诺酮的最大残留量。本文对喹诺酮类药物残留的分析方法进行了分析，为建立动物源性食品安全检测体系提供参考。对微生物检测法、色谱法、免疫分析法和电化学分析法等目前主要喹诺酮类药物残留的分析方法作了综述, 指出色谱法、质谱联用法是国际上公认的确认食品中喹诺酮类药物残留的方法, 生色物传感技术和肢体金免疫法将是今后研究和开发喹诺酮类残留物检测方法的重要方向.

关键词: 喹诺酮类; 药物残留; 检测方法; 动物性食品

Research progress of detection method for quinolones

residues in edible animal productsm

Abstract： Quinolones are widely used in the treatment of infectious diseases in humans and animals, the main mechanism of action is inhibition of DNA topoisomerase Ⅱ. Such broad spectrum antimicrobial drugs, efficient, low toxicity, tissue penetration, and low prices, it has become one of anti-infectives and aquaculture veterinary clinical diagnosis of the most important. Because quinolones are widely used in edible animals, which can lead to drug-resistant residual pathogens in the human body, so the European Union and the Joint Expert Committee on Food Additives already specifies the maximum residue levels of several quinolone. In this paper, the analysis methods quinolones were analyzed to provide a reference for the establishment of animal-derived food safety testing system. Microbial detection method, the residual method of analysis chromatography, immunoassay and electrochemical analysis method is mainly quinolones were reviewed, noting chromatography, mass spectrometry is recognized internationally confirmation quinolones residues in food method, chromogenic materials and physically sensing technology will be an important gold immunoassay direction of future research and development of fluoroquinolones residue detection method.

Keywords: quinolones; drug residues; detection methods; animal food

1 引言

喹诺酮类药物是一族人工合成的抗生素, 因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性和毒副作用小等特点, 被广泛应用于畜牧、水产等养殖业中. 该类药物长期使用会造成动物性食品中喹诺酮类药物残留, 从而对人体造成危害. 欧盟( EU ), 联合国粮农组织( FAO ), 世界卫生组织(WHO) , 食品添加剂与污染物联合专家委员会( JEC - FA ) 1990年就规定了几种喹诺酮的最大残留量所以开发灵敏、效的喹诺酮类药物检测分高析方法具有重要的经济效益和广泛的社会效益. 目前关于喹诺酮类药物残留分析方法的报道较多, 通常采用微生物法、液相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、免疫分析法和电化学法等.

2微生物检测法

微生物检测法是一种经典的生物活性测定方法, 此方法主要包括管碟法和浊度法, 应用较为广泛。微生物检测法的优点在于灵敏度高、分析精度和线性关系好, 在大规模的定性筛选工作中具有一定的应用价值, 但也存在易受干扰、漏检易和测定结果误差较大等特点。

3仪器分析法 3. 1 色谱法.

色谱法主要包括气相色谱法( GC ), 液相色谱法( LC )和高效液相色谱法 ( H PLC) 等. 近年来, 国内外关于用色谱法测定动物性食品中喹诺酮类药物残留的文献较多, 且分析工作者们不断改进前处理技术, 使药物回收率不断提高。 3.1. 1 气相色谱法..

用碳酸钾作碱性催化剂、五氟苄基溴丙酮作衍生化试剂、西诺沙星的五氟苄基酯作内标, 在OV - 101柱上测定了片剂中萘啶酸含量, 结果令人满意. 采用了衍生化技术, 以壬烷为内标, 建立了一种测定药物制剂中培氟沙星含量的气相色谱法 3.1 .2 液相色谱法.

液相色谱法是早期用来检测FQ s残留常用的方法, 现在几乎已被高效液相色谱法取代

3. 1. 3 高效液相色谱法

采用HPLC检测动物性食品中喹诺酮残留的研究报道很多, 残留检测也多以此法为国家标准采用HPLC检测定鸡组织中环丙沙星残留, 平均回收率在73%以上, 可满足鸡组织中环丙沙星残留检测要求。采用

HPLC法同时检测8 种喹诺酮类残留, 平均回收率为70%~99.5%高效液相色谱法具有分离效率高、分离分析速度快、灵敏度高、假阳性少等优点, 但处理过程复杂、耗时比较长、成本高、分析速度慢、回收率偏低, 不适合用于大规模的样品检测.

随着对最低残留限量要求的降低, 检测器的配备也有所变化, 大多方法采用紫外检测器。Kunihir o 等( 2005) 用高效液相色谱法同时测定鸡血浆、肌肉、鸡蛋中的磺胺二甲氧嘧啶和它们的N4羟基乙酰化代谢产物。该方法用高效液相色谱二级管检测阵列, 实现了操作过程的全自动化, 但所用检测器为紫外检测器, 检测限一般在0. 01 mg/ kg 以上[6,7]。苏敏等( 2008) 用荧光胺衍生化液相色谱法检测动物肝脏中10 种磺胺类药物残留, 检测限达0. 002 mg/kg , 使检测限进一步降低。此外, 在检测过程中实现了梯度洗脱, 使一次分析可以检测更多种的药物。 3. 2 联用技术.

采用2种或 2种以上的分析技术联合应用, 以达到取长补短的效果. 应用较多的有液相色谱- 质谱联用法( LC - M S) , 液相色谱- 荧光法( LC FD ), 液相色谱- 串联质谱法( H PLC - M S /M S) 等。采用LC - FD 法在鸡蛋中同时检测7种喹诺酮类的方法,

采用LC - M S /M S法检测了动物组织中16种喹诺酮类药物残留, 该法快速简便、准确, 能满足国内外的各项技术指标, 可用于动物性食品中喹诺酮类药物残留的确证检测, 但仍存在处理过程复杂、耗时比较长、成本高等缺点。. 4免疫分析法

免疫分析法是以抗原和抗体的特异性、可逆性结合为基础, 对新型动物性食品中喹诺酮类残留进行定量及半确证的方法, 主要包括酶联免疫法( EL ISA ) , 放射免疫测定法( R I ) 等. 免疫分析技术A最突出的优点是操作简单、速度快、分析成本低, 但 假阳性率较高

4.1 酶联免疫法

酶联免疫法是以抗原和抗体特异性反应为基础, 加上酶与底物的特异性反应, 使反应的灵敏度放大的一种技术, 是一种基本的酶免疫分析方法1971年, Engval用碱性磷酸酯酶标记的3gG测定1gG, 随后这种方法得到迅速发展和不断完善. Duan JH 等制备了环丙沙星多克隆抗体, 并建立了检测环丙沙星残留的C i - EL ISA 方法. 利用生物免疫技术, 以牛血清蛋白为载体蛋白, 结合氟喹诺酮类药物制备相应的特异性抗体蛋白, 结合氟喹诺酮类药物制备相应的特异性抗体, 将制

备的特异性抗体固定在压电晶体表面形成生物识别元件, 检测食品中氟喹诺酮类药物的残留 4.2 放射免疫测定法

放射免疫测定法是将放射性同位素示踪技术和免疫化学技术结合起来的方法, 具有灵敏度高特异性强, 样品容量大及仪器化程度高等特点. 但由于需要大型仪器, 检测费用昂贵且具有一定的放射性污染, 所以此法不适合在基层中推广应用 5高效毛细管电泳法

毛细管电泳( CE) 是以高压电场为驱动力, 在细内径毛细管内荷电离子按其淌度或分配系数的不同进行分离的一种电泳技术. M atth ia s F 等。利用胶束毛细管电泳法结合在线推扫富集技术对组织中残留的痕量环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星进行了检测, 弥补了毛细管电泳法检测灵敏度低的缺点, 大大减化了操作过程, 为动物性食品组织中残留的痕量药

物检测提供了一种新的简便可靠的方法. 毛细管电泳法也有分离率高, 操作简单、色谱柱不受样品污染、分离速度快、样品用量少等优点. 但制备能力差, 光路太短, 非高灵敏度的检测器难以测出样品峰, 所需仪器昂贵、复杂. 毛细管电泳是近年来较有效的分离技术之一, 应用前景广阔.

6电化学分析方法

电化学分析法通过测定电化学电池的某些参数, 如电导、电位、电量和电流等, 或者测量这些参数在某个过程中的变化情况求得分析结果. Guido E P等。采用电化学生物传感器对牛奶中的喹诺酮类药物残留进行检测, 电化学分析法具有设备简单、分析速度快、灵敏度高、选择性好、用范围广等优点,但也存在一些缺点, 如易干扰、重现性不好、设备复杂等.

7结语

综上所述, 在现有的喹诺酮类残留药物检测的方法中, 色谱法、质谱联用法是目前国际上公认的确证方法. 近年来, 我国药典中采用高效液相色谱检测喹诺酮类药物含量的方法不断增多, 在文献中所占比例逐年升高, 但其仍需不断地完善, 以求简化操作过程、改进仪器设备、降低检测成本等. 微生物法不能用于定量分析, 检测限常高于最大残留限量, 只能用于初步的定性筛选. EL ISA 法具有快速、简单、特异性高、灵敏性高、实验成本低、试剂稳定性好和操作安全的优点, 可以作为一种快速筛选方法, 处理数量较大的样品, 其缺点则是影响