沈萍 - 陈向东 - - 高教出版社微生物学课后习题答案 - - 图文

进入视野，在一个相对明亮的背景中形成一个暗的物像。

17．聚焦扫描激光显微镜(confocal scanning laser microscope，CSLM) 这种显微镜采用激光作为光源，每次仅对一个点进行照射，从而大大减少样品其他部分发出的杂散光的干扰。观察时通过激光器或载物台扫描，计算机处理，最终获得反差鲜明、高分辨率的三维立体数字图像。

18．荧光显微镜(fluorescence microscope) 这种显微镜用紫外线或蓝紫光照射经过荧光染料染色的样品，然后观察激发出的荧光所形成的物像。

19．数值孔径(numerical aperture) 决定显微镜物镜分辨率性能物理指标，取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率。

20．相差显微镜(phase—contrast microscope) 这种光学显微镜通过特殊的装置把样品不同部位间折射率和细胞密度的微弱差异转变为人眼可以察觉的明暗差，可在不染色的情况下对透明的活细胞及其内部结构进行直接观察。

21．分辨率(resolution) 能辨析两点之间最小距离的能力，距离越小，分辨率越高。

22．扫描电子显微镜(scanning electron microscope，SEM) 这种电子显微镜用电子束扫描样品表面，收集从表面发出的二次电子形成样品的表面图像。

23．扫描探针显微镜(scanning probe microscope) 通过在物体表面移动一种敏锐的探针来研究表面特征的显微镜(如扫描隧道显微镜)。

24．扫描隧道显微镜(scanning tunnelingmicroscope) 扫描探针显微镜的一种，用细小的探针在样品表面进行扫描，通过检测针尖和样品间隧道效应电流的变化形成物像。

25．透射电子显微镜(transmissionelectronmicroscope) 这种显微镜用电子束透射样品，用磁透镜使散射的电子聚焦成像。

26．反差(contrast) 被观察物区别于背景的程度。

27．暗视野显微镜(dark—field microscope) 这种显微镜利用特殊的聚光器进行斜射照明，经样品反射或折射的光线进入物镜成像。

28．固定(fixation) 制样过程中使整个机体及其细胞的内、外结构被保存并固定在适当位置的过程。

29．负染色(negative staining) 染料使背景颜色加深而样品没有着色的染色法。 30．菌丝体(mycelium) 聚成一团的分支菌丝，见于真菌和某些细菌。 31．菌丝(hypha) 大多数霉菌和某些细菌的结构单位，管形丝状体。 32．双球菌(diplococcus) 分裂后成对排列的球菌。 33．球菌(COCCUS) 细胞大致呈球状的细菌。 34．螺菌(spirillum) 刚性的螺旋状细菌。

35．螺旋体(spirochete) 柔韧的螺旋状细菌，具有周质鞭毛。 36．杆菌(rod) 细胞呈杆状的细菌。

37．柄细菌(prosthecate bacteria) 细胞上有柄、菌丝、附器等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性细柄的细菌。

38．霉菌(mold) 以多细胞丝状群体形式生存的真菌。

39．真菌(fungi) 有线粒体，无叶绿体，没有根、茎、叶分化，以无性和有性孢子进行繁殖的真核微生物。

40．酵母菌(yeast) 单细胞真菌。

41．藻类(algae) 能进行光合作用的真核微生物。 42．原生动物(prokaryote) 缺少真正细胞壁，具有运动能力，进行吞噬营养的单细胞真核微生物。 二、习 题 填空题

1．动植物的研究能以 体为单位进行，而对微生物的研究一般用 体。

2．在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物，其中只有

3．一般情况下，培养微生物的器具，在使用前必须先行 ，使容器中不含 。 4．用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括： 、 和 、 。

5．微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行 、 的重要依据。

6．微生物保藏的目标就是要使所保藏菌株在一段时间不 、不 和不 。 7．一般说来，采用冷冻法时，保藏温度越 ，保藏效果越 。 8, 、 和 是影响显微镜观察效果的3个重要因素。 9．光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是 ，这时一般使用 X的目镜，和 x的物镜，并应在物镜镜头和玻片之间加 香柏油 。

10．采用明视野显微镜观察未经染色的标本(如活的细胞)时， 光的 和 都没有明显的变化，因此，其形态和内部结构往往难以分辨。

11．在 的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体，这就是荧光显微技术的原理。

12．透射电子显微镜用电子作为 ，因此其分辨率较光学显微镜有很大提高，但镜筒必须是 环境，形成的影像也只能通过 或 进行观察、记录。

13．在显微镜下不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其基本形态可分为 、 与 3种。

14．霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝交织在一起，称为 。在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为 ；另一部分则向空中生长，称为 。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成 。

15． 是一类缺少真正细胞壁，细胞通常无色，具有运动能力，并进行吞噬营养的单细胞真核生物。它们个体微小，大多数都需要显微镜才能看见。 选择题（4个答案选1）

1．培养微生物的常用器具中，( )是专为培养微生物设计的。 A平皿 B试管 C烧瓶 D烧杯

2．( )可用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

A选择平板 B富集培养 C稀释涂布 D单细胞显微分离 3．下面哪一项不属于稀释倒平板法的缺点?( )

A菌落有时分布不够均匀B热敏感菌易被烫死 C严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响 D环境温度低时不易操作

4．下面哪一种方法一般不被用作传代保藏?( ) A琼脂斜面 B半固体琼脂柱 C培养平板 D摇瓶发酵

5．冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于( )的环境，代谢水平大大降低。 A干燥、缺氧、寡营养 B低温、干燥、缺氧 C低温、缺氧、寡营养 D低温、干燥、寡营养

6．对光学显微镜观察效果影响最大的是( )。 A目镜 B物镜 C聚光器 D总放大倍数 7．暗视野显微镜和明视野显微镜的区别在于( )。A目镜 B物镜 C聚光器 D样品制备 8．相差显微镜使人们能在不染色的情况下，比较清楚地观察到在普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构，是因为它改变了样品不同部位间光的( )，使人眼可以察觉。

A波长 B颜色 C相位 D振幅

9．( )不是鉴别染色。A抗酸性染色 B革兰氏染色 C活菌染色 D芽孢染色 10．细菌的下列哪项特性一般不用作对细菌进行分类、鉴定?( )

A球菌的直径 B球菌的分裂及排列 C杆菌的直径 D杆菌的分裂及排列 是非题

1．为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，并在使用前进行高温干热灭菌。

2，所有的微生物都能在固体培养基上生长，因此，用固体培养基分离微生物的纯培养是最重要的微生物学实验技术。

3．所有的培养基都是选择性培养基。

4．直接挑取在平板上形成的单菌落就可以获得微生物的纯培养。 5．用稀释摇管法分离获得的微生物均为厌氧微生物。

6．冷冻真空干燥保藏、液氮保藏法是目前使用最普遍、最重要的微生物保藏方法，大多数专业的菌种保藏机构均采用这两种方法作为主要的微生物保存手段。

7．光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率(约1．5)高于空气(1．0)， 因此，使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以进一步改善光学显微镜的观察效果。

8．与其他电子显微镜相比，扫描隧道显微镜在技术上的最大突破是能对活样品进行观察。 9．与光学显微镜相比，电子显微镜的分辨率虽然有很大的提高，但却无法拍摄彩色照片。

10．和动植物一样，细菌细胞也会经历由小长大的过程，因此，在相同情况下应选择成熟的细菌而非幼龄细菌进行显微镜观察，这样可以看得更清楚。

11．霉菌、酵母菌均是没有分类学意义的普通名称。 问答题

1．一般说来，严格的无菌操作是一切微生物工作的基本要求，但在分离与培养极端嗜盐菌时常在没有点酒精灯的普通实验台上倾倒培养平板、在日常环境中直接打开皿盖观察和挑取菌落，而其研究结果并没有因此受到影响，你知道这是为什么吗?

2．如果希望从环境中分离得到厌氧固氮菌，你该如何设计实验?

3．为什么光学显微镜的目镜通常都是15X?是否可以采用更大放大倍率的目镜(如30x)来进 一步提高显微镜的总放大倍数?

4．为什么透射电镜和扫描电镜对样品厚度与大小的要求有如此大的差异?能否用扫描电镜来观察样品的内部结构，而用透射电镜来观察样品的表面结构?

5．试论电子显微镜在进行生物样品制备与观察时应注意的问题。

6．对细菌的细胞形态进行观察和描述时应注意哪些方面?你是否能很快地在显微镜下区分同为单细胞的细菌、酵母菌和原生动物? 三、习题解答

填空题 1．个 群 2．纯 3。灭菌 任何生物 4．稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线法 5．分类 鉴定 6．死亡 污染 变异 7．低(高) 好(差) 8．放大 反差 分辨率 9．1 000～1 500x 10或15 90或100 香柏油 10．’波长 振幅 11．紫外线 12．光源 真空 荧光屏 照片 13．球状 杆状 螺旋状 14．菌丝体 营养菌丝 气生菌丝 繁殖菌丝 15．原生动物 选择

题 1． A 2． B 3． A 4． D 5． B 6． B 7． C 8． D 9． C 10． D

是非题 错错对错错 对错对对错 对 问答题

1．培养极端嗜盐菌的培养平板需要添加很高浓度的氯化钠(25％)，实验室环境中的一般微生物都不能在这种选择培养基上生长，因此在实验过程中即使不采取无菌操作技术，实验结果仍不会受到影响。 2．（1）根据选择分离的原理设计不含氮的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氮素应来自固氮作用。（2）将环境样品(例如土样)稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。对厌氧罐采用物理、化学方法除去氧气，保留氮气。培养后在乎板上生长出来的细菌应是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。（3）挑取一定数量的菌落，对应点种到两块缺氮的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外保温培养。在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌，而在厌氧罐外的平板上不生长，在厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氮菌。（4）对分离得到的厌氧固氮菌菌落样品进行系列稀释，涂布于相应的选择平板，重复上述步骤直到获得厌氧固氮菌的纯培养。

3．光学显微镜的分辨率受到光源波长及物镜性能的限制，在使用最短波长的可见光(4．50nnl)作为光源时在油镜下可以达到的最大分辨率为0．18 μm。由于肉眼的正常分辨能力一般为 0．25mm左右，因此光学显微镜有效的最高总放大倍数只能达到1 000～1 500倍。油镜的放大倍数是100x，因此显微镜配置的目镜通常都是15 x，选用更大放大倍数的目镜(如30 x)进一步提高显微镜的放大能力对观察效果的改善并无帮助。

4．（1）透射电子显微镜的成像原理类似于普通光学显微镜，作为光源的电子束在成像时要穿透样品。由于电子束的穿透力有限，因此在进行透射电镜观察时要求样品一定要薄。而扫描电镜的成像原理类似于电视或电传真照片，图像是通过收集样品表面被激发的二次电子形成的，因此对样品的厚度并无特别的要求。（2）扫描电镜一般被用于观察样品的表面结构，但通过样品制备过程中的冰冻蚀刻技术，用扫描电镜也可观察到样品的内部结构，获得立体的图像。（3）透射电镜一般通过超薄切片技术观察样品的内部结构，但通过样品制备过程中的复型技术，用透射电镜也可对样品的表面结构进行观察。

5．（1）电子束的穿透能力：电子束的穿透能力是十分有限的，超薄切片是基本的透射电镜实验技术。相比之下，扫描电镜对样品的大小和厚度没有严格的要求。（2）生物组织的特点：生物组织的主要成分之一是水，若生物样品不经处理直接放进电镜，镜筒中的高真空必然会使样品发生严重的脱水现象，失去样品原有的空间构型，所以一般都不能用电镜进行生物样品的活体观察。而且，由于生物样品很容易遭到破坏，在对样品进行固定、干燥、染色及其他一些处理过程中，也必须随时注意使样品尽量保持生活状态下的精细结构，而不严重失真。另外，在扫描电镜的使用中，除要求样品干燥外，还需要样品具一定的导电能力，以减少样品表面电荷的堆积并得到良好的二次电子信号。而生物样品一般都是不导电的，所以在制备扫描电镜生物样品时，一般需在其表面镀上一层金属薄膜。（3）增加样品的反差：显微观察时，只有样品具有一定的反差，才能得到清晰的图像。光学显微镜可以通过各种染色技术来增加样品的反差，并得到彩色的样品图像。而在电镜的使用中，彩色染料是不采用的，因为两种不同的颜色在电镜中是不能区别的。电镜中生物样品不同结构之间反差的取得一般是用重金属盐染色或喷镀，凡是嗜金属的结构，对电子的散射与吸收的能力增强，易于形成明暗清晰的电子图像。而且，由于电子图像是靠不同电子密度形成的亮度差异而构成，所以，电镜得到的电视或照相图像都是黑白的。

6．（1）首先应使用稀释涂布等方法对待检菌株的纯度、群落形态、生理特性等进行检查、确认。（2）选用正常的新鲜培养基和新鲜培养物进行培养和观察，避免培养过程中一些物理、化学条件的改变或培养时间过长等因素对细胞形态的影响。（3）报告细胞大小时应选用多个细胞检测的平均数，并记录所用的实验方法，包括培养条件、培养时间、样品制备方法和染色方法等。（4）可从大小和形态上对细菌、酵母菌和原生动物进行区分。酵母菌、原生动物个体较大，一般可用低倍镜观察，酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形，不具运动性，原生动物细胞形态多变，能够运动。相比较而言，细菌细胞一般较小，需用高倍镜或油镜才能看清。 附：显微镜种类比较 显微镜类型 基本原理及特点 应 用 光线透射照明，物像处于亮背景中。为光

明视野各种情况下染色样品或活细胞个

学显

显微镜 体形态的观察

微镜的最基本配置，价格便宜、容易使用

明视野显微镜下不易看清的活细胞的观察；不易被染色或易被染色

暗视野 通过特殊的聚光器实现斜射照明，亮物像

过程破坏的细胞的观察(例如对梅

显微镜 形成于暗背景中

毒密螺旋体的检测)；观察活细胞的运动性

光学相差显通过特殊的聚光器和物镜提高样品不同部

活细胞及其内部结构的观察

显 微镜 位间的反差(明暗差异) 微镜 经荧光染料染色或荧光抗体处理的样品在

环境微生物的直接观察；病灶或医

荧光显紫外线照射下激发出各种波长的可见光，在

学样品中特定病原微生物的直接

微镜 黑暗

检测(使用特定的荧光抗体)

的背景中形成明亮的彩色物像

激光作为光源，每次照明样品的一个点，连续 对完整细胞的细微立体结构进行

共聚焦

扫描后经计算机处理获得样品的二维或三观察

显微镜

维 和分析 图像。显微镜价格昂贵