无菌检查用培养基灵敏度检查标准操作规程

文件名称 编 制 无菌检查用培养基灵敏度检查标准操作规程 文件编号 生效日期 审 核 批 准 1.目的 建立无菌检查用培养基灵敏度检查的标准操作规程，保证无菌检查结果的准确性可靠性。 2.范围 无菌检查用培养基的灵敏度检查。 3.职责 检验员实施本操作规程，质量控制部主管监督本规程正确执行。 4.程序 4.1实验设备及用具 高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、试管、试管架、灭菌生理盐水、含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液、0.9%无菌氯化钠溶液、75%酒精棉球、滴管。 4.2 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂斜面培养基。 4.3 菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕 生孢梭菌( Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕 白色念珠菌( Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉( Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕 4.4 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养 18小时～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养 24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu （菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。 菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃可在24小时内使用。黑曲 1

文件名称 编 制 无菌检查用培养基灵敏度检查标准操作规程 文件编号 生效日期 审 核 批 准 霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 4.5 培养基接种 取每管装量为 12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支,分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。 4.6 结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。 5.附件及附录 5.1培养基灵敏度检查记录 2