创新性实验

Huang等报道了基于铂化合物的磷光探针4.同时设计了不含醛基的对比化合物5.2在560nm有强的橘黄色发射峰，由于醛基强的吸电子能力，1的最大发射波长蓝移至510nm，发光颜色变为相应的绿色。1在乙腈：水(40 lM, pH7.2, 4:1 v/v)溶液中量子产率为1.4﹪.加入hcy，最大吸收峰红移至555nm，相应的发光颜色由绿色变为橘黄色。其它氨基酸及谷胱甘肽不干扰测定。

Zhang等报道了Y形双光子荧光传感器3127.相比于单光子荧光探针，双光子荧光探针的激发波长在近红外区，有很低的背景光，弱的光致伤害，在低浓度有高的发射。这些特性使双光子探针适于生物成像。在DMF中，cys导致31的单光子激发荧光发射光谱明显的改变，发射峰由535nm蓝移至498nm，量子产率由0.66降低至0.31，相应的荧光颜色由绿色变为青色。双光子激发荧光发射光谱研究显示，在787nm激发，31的双光子激发荧光强度是31-cys（40倍量）的10倍，伴随着30nm蓝移。

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Duan等报道了荧光探针3228. 32是一个电子受体-芳香荧光团-电子受体π-π共轭体系。当32与cys反应，由于烃基弱的推电子能力，π-π共轭变为电子受体-芳香荧光团-电子给体。因此推-拉效应更有效，导致高的荧光量子产率和伴随发射光谱红移。在乙醇：水(60:40, v/v) pH 7.2HEPES 缓冲(50 mM)，将cys加入含32的溶液中，最大吸收峰由375nm蓝移至370nm。同时荧光发射增强伴随着

25nm红移，荧光量子产率由0.25增至0.40，荧光颜色由蓝变青。探针被应用于V79细胞成像。

Lin等报道了基于分子内电荷转移的荧光探针3329.当染料富电子基团共轭缺电子基团，受到激发将会发生从供体到受体的分子内电荷转移（ICT）。当cys或hcy和探针反应，探针电子供体-受体体系共轭破坏，ICT被关闭，导致吸收和发射波谱上较大的蓝移。在10 mMHEPES buffer, pH 7.4/DMF (v/v, 1: 3)中，加入cys或hcy探针最大吸收峰由376nm蓝移至330nm，荧光发射光谱由519nm到376nm发生125nm蓝移。在394nm和519nm处荧光强度之比I394/I519，加入cys增强176倍，加入hcy增强920倍。探针的荧光颜色也由绿变蓝。加入其它氨基酸、葡萄糖、含硫化合物没有导致明显的光谱变化。探针对cys在0.6到80×10-5M有良好的线性范围。生理学健康血浆中半胱氨酸的含量范围在24-36×10-5M，预示探针对检测血浆中半胱氨酸有潜在的应用。

Kim等在2008年报道了两个香豆素分子（34和35）30-31。在含有34的pH 7.4HEPES 缓冲溶液中，加入hcy 450nm荧光发射强度增强100倍，加入cys增

强49倍。在365nm激发，只有含cys和hcy的探针溶液显示亮蓝色荧光。探针荧光增强可能因为以下两个原因：第一、将hcy加入探针34中，苯酚质子和thiazinane氮原子形成氢键，阻止了在先前报道的thiazinane香豆素可能发生的PET猝灭。第二、thiazinane的形成，羰基sp2杂化轨道转化为sp3杂化轨道，使从香豆素HOMO到醛羰基LUMO的电荷转移导致的荧光猝灭被降低，从而使探针的荧光增强。在含有10mM谷胱甘肽人血浆中，荧光增强也被观察到。

探针35含有推-拉类型的香豆素荧光团31。二乙基胺基团推电子，醛基和羰基拉π电子，35在488nm产生强的荧光发射。在乙醇溶液中加入500倍量Hcy或cys，由于36的荧光团附近thiazinane/thiazolidine的氮原子有一对孤电子，产生光致诱导电子转移使1的荧光猝灭。发射峰也蓝移至470nm。

Li等报道了探针3732，37能在水溶液和活细胞中从hcy和GSH中有效的区分cys。37无色有弱的荧光。在含有37的乙醇-PBS (0.1 M, pH=7.00, 3 : 7,v/v)溶液中，加入200μMcys，在531nm出现新的吸收峰，荧光增强20倍。37溶液的荧光强度在μM级与cys成线性比例，检测极限为7.35× 10-8 M.加入Hcy导致小的荧光减弱。其它氨基酸和GSH不干扰测定。比hcy高的选择性可能是因为与不

饱和醛反应，37与cys反应产生五元杂环，形成不稳定的化合物38，接着发生开环反应促进39水解为40，导致荧光增强，溶液颜色由无色变为紫色。37与hcy反应生成41，但为无色并无荧光。37被应用于MCF和PC12细胞成像。对细胞内cys浓度改变产生变化。并用于检测人尿液cys，与文献报道数据相符。

8、基于巯基亲核加成

Zhang等报道了一个发射增强荧光cys/hcy探针38并应用于生物成像。在含有38的甲醇：HEPES（7：3，v/v）pH=7的缓冲溶液中，加入cys或hcy，最大吸收峰由430nm红移至580nm，在465nm有一个明显的等吸收点，相应的颜色由黄绿色变为橘红色。激在发波长为465nm时，加入40倍的hcy，含有38的溶液588nm处荧光增强75倍，相应强烈的橘红色荧光。由于位阻效应，其它硫醇在此条件下几乎不发生反应。38被应用于激光共聚焦成像（CLSM）和双光子荧光成像（TPLSM）。淋巴囊癌细胞（ACCM）激光共聚焦成像能显示cys和hcy的亚细胞分布。在880nm双光子荧光成像显示，胰腺癌细胞（PANC）的荧光信号定位在细胞核周围区域和类似核仁区域，HeLa细胞的荧光广泛分布在细胞液和细胞核。PANC和HeLa荧光成像的不同显示不同细胞内cys和hcy的代谢机理是有差异的。

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