生物技术制药模拟题答案最终版

2.在植物组织和细胞培养过程中，影响植物次级代谢产物产生和累积的因素主要有哪些？

影响次级代谢产物产生和累积的因素主要有： 一、外植体的选择

不同外植物体的悬浮细胞培养物，其最大次级代谢产物的累积时间各异。 二、培养条件的影响

营养成分、生物及非生物元素、酸度、通气以混合程度、与接种有关的因素以及剪切力、搅拌频率、温度和光。 1、内在因素

（1）接种和诱导：

长春花培养物中蛇根碱的合成要求其外植体直径在1～12cm之间，在此条件下才能分泌噻吩类成分。

单冠毛菊悬浮细胞培养物暴露于蓝光中时才能合成花青苷。 （2）培养基的组成：

磷、氮、铜、碳源、植物生长调节剂、O2和pH等。 2.两步培养法

第一步使用适合细胞生长的培养，营养丰富；

第二步使用适于次级代谢产物合成的培养基，较低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或少量的碳源。 3、培养环境的外部因素

（1）温度：（2）搅拌频率：

（3）培养容器的影响： （4）光的影响：

3．简述基因工程药物生产的一般程序。

4.基因工程菌在传代过程中常出现的质粒不稳定现象主要表现在哪些方面？如何提高质粒的稳定性？ 主要表现在： （1）分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。(常见) （2） 结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。

提高质粒稳定性的方法

1、两阶段培养法：第一阶段使菌体生长至一定密度，第二阶段诱导外源基因的表达。在培养基中加入选择性压力如抗生素等，以抑制质粒丢 失菌的生长。 2、通过控制环境参数（温度、PH、培养基组分和溶解氧浓度），调节比 生长速率，使工程菌生长具有优势。有些含质粒的菌对发酵环境的改变 比不含质粒的菌反应慢，因而间歇改变培养条件以改变这两种菌的比 生长速率，可以改善质粒的稳定性。

4．简述噬菌体抗体库技术的基本方法和特点。 噬菌体抗体库技术的基本方法 ⒈获取目的基因 ⒉抗体库技术的载体 ⒊淘筛

⒋表达与鉴定

噬菌体抗体库技术的特点 ⒈模拟天然全套抗体库

⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊可获得高亲和力的人源化抗体

6. 生产用动物细胞的种类有哪些？

原代细胞：是直接取自动物组织、器官,经过粉碎、消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。

二倍体细胞系：原代细胞经过传代筛选克隆，从多种细胞成分的组织中，挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。它具备“正常”细胞的特点即染色体组型仍是2n的核型；具有明显的贴壁依赖型和接触抑制的特性；只有有限的增殖能力，一般可连续传代培养50代；无致瘤性。

转化细胞系：通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。转化过程可以是自发的，和人工的，从肿瘤组织中。 融合细胞系：用人工方法使离体的两个不同的细胞融合并成一个细胞，从而培养出一系列有其特性的杂种细胞和新的物种。

重组工程细胞系：有以上这些细胞进行融合和重组的工程细胞系。

7．简述单克隆抗体的大量制备方法。 单克隆抗体的大量制备

体外培养法可获的10μg/ml抗体 体内诱生法可获的5～20mg/ml抗体 用BALB/c小鼠。

降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离心 上清。

8．简述动物细胞培养的方法和操作方式。 动物细胞培养的方法 依细胞种类: 原代培养： 传代培养： 依培养基:

液体培养： 固体培养： 依培养器和方式:

1.静止培养： 2.旋转培养： 3.搅拌培养： 4.微载体培养： 5.中空纤维培养：

6.固定床或流化床培养： 从生产实际分为: 悬浮培养 贴壁培养

贴壁-悬浮培养

9．固定化酶的特点有哪些？如何制备固定化酶？ 固定化酶的特点

具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。 优点① 可多次使用，在多数情况下，酶的稳定性提高

② 反应后，酶、底物、产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。 ③ 反应条件易控制，可实现转化反应的连续化和自动控制。 ④ 酶的利用效率高。单位酶催化的底物量增加，用酶量减少。 ⑤ 比水溶性酶更适合于多酶反应。 缺点① 固定化时，酶活力有损失。

② 增加了生产的成本，工厂初始投资大

③ 只能用于可溶性底物，而且较适于小分子底物，对大分子底物不适宜。 ④ 胞内酶必须经过酶的分离纯化

⑤ 与完整菌体相比，不适宜于多酶反应，特别是需要辅助因子的反应。 固定化酶制备方法

固定化酶的制备方法有物理法和化学法两大类。 物理方法包括物理吸附法、包埋法等。

化学法包括结合法、交联法。结合法又分为离子结合法和共价结合法。是将酶通过化学键连接到天然的或合成的高分子载体上,使用偶联剂通过酶表面的基团将酶交

联起来,而形成相对分子量更大、不溶性的固定化酶的方法. 其中吸附法和共价键法又可统称为载体结合法。 具体方法 吸附法

利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法。通常有物理吸附法和离子吸附法。

常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。

采用吸附法固定酶，其操作简便、条件温和，不会引起酶变性或失活，且载体廉价易得，可反复使用。 载体结合法

最常用的是共价结合法，即酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接。 交联法

依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构，使之不溶于水从而形成固定化酶。 包埋法

酶被裹在凝胶的细格子中或被半透性的聚合物膜包围而成为格子型和微胶囊型两种。包埋法制备固定化酶除包埋水溶性酶外还常包埋细胞，制成固定化细胞

10．基因工程制药中如何选择宿主细胞？请列举几种常用的宿主细胞。 宿主细胞的选择

宿主细胞的基本要求：

① 容易获得较高浓度的细胞； ② 能利用易得廉价原料； ③ 不致病、不产生内毒素；

④ 发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态； ⑤ 容易进行代谢调控； ⑥ 容易进行DNA技术操作； 宿主细胞的 分类：

① 原核细胞，常用的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链 霉菌等；

② 真核细胞，常用的有酵母、丝状真菌、哺乳动物细 胞。

⑦ 产物的产量、产率高，且易提取纯化。

六、论述题（共10分）

1. 试论述人类基因组计划在生物医药研究和开发方面的意义。 （1）、HGP对人类疾病基因研究的贡献

人类疾病相关的基因是人类基因组中结构和功能完整性至关重要的信息。对于单基因病，采用“定位克隆”和“定位候选克隆”的全新思路，导致了亨廷顿舞蹈病、遗传性结肠癌和乳腺癌等一大批单基因遗传病致病基因的发现，为这些疾病的基因诊断和基因治疗奠定了基础。对于心血管疾病、肿瘤、糖尿病、神经精神类疾病（老年性痴呆、精神分裂症）、自身免疫性疾病等多基因疾病是目前疾病