脂代谢紊乱导致脂肪肝及高脂血症发生的机制

重点研究上述三大诱因是如何通过改变肝脏营养感应信号和代谢性核受体/转录因子的功能引起肝脏自身的脂代谢稳态异常，导致脂肪在肝脏的聚集；以及三大诱因如何通过?脂肪-肝脏轴? 和?胰腺-肝脏轴?进一步影响肝脏的脂肪代谢稳态失衡。课题5主要是探讨肝外脂肪是如何异常转运到肝脏，并在肝脏聚集的分子机制。课题4和课题5相互关联是NAFLD和高脂血症发生和发展的2个重大环节；课题4和课题5所建立的细胞和模式动物平台也为课题1和课题2易感基因和营养/运动相互作用促进高脂血症和NAFLD分子机制的阐明提供保证。课题6重点是发现NAFLD与高脂血症生物标志物，课题1-5将为这些代谢小分子生物标志物的动物和人群验证提供帮助；此外，课题6的生物标志物的发现也将促进课题3-5的机制研究。

四、年度计划

年度 研究内容 预期目标 1. 通过B超、CT、肝活检完成病例-1. 明确与中国人群NAFLD、高对照人群入组，收集外周血及肝组织标本；获取健康相关体征指标、脂血症相关的易感基因/易感位点； 血脂、血糖、肝超声、肝功能以及2. 建立完备的高脂血症和生活方式等指标； 2. 进行全基因组外显子深度测序，并作病例－对照关联分析； NAFLD患者及其对照队列，并建立相应的信息数据库； 3. 获得队列人群的基线资料； 第 3. 在长期随访的大样本人群中选取对4. 确定导致我国人群NAFLD和照及NAFLD病例，针对初筛获得的重要SNPs进行验证； 高脂血症发生、发展的重要生活方式和膳食营养因素； 一 4. 选择年龄、性别等因素匹配的儿童5. 明确不同膳食因子在细胞及 年 病例－对照组，开展母婴肥胖程度、喂养方式与饮食营养结构的队列研究； 5. 利用前期已建立的人群队列，探寻与NAFLD和高脂血症的发生、发展紧密相关的膳食营养成分(不同动物模型中对PRR及其调控大分子表达水平的影响； 6. 阐明PRR及其调控大分子在人NAFLD/NASH发生发展过程中肝脏组织中表达变化规律； 脂肪酸和糖)和生活方式（运动和生7. 绘制PRR在代谢性炎症中的活节律）； 6. 在两种“极端”表现人群，分析影响NAFLD和高脂血症发生、发展的膳食营养成分； 动态修饰谱、信号转导谱及靶基因表达谱及其与疾病发生发展的关系； 8. 初步完成代谢性核受体缺陷年度 研究内容 7. 膳食因子（不同脂肪酸和糖、胆固醇）引起的代谢性炎症对PRR表达及活性的影响； 8. 构建代谢性核受体缺陷的NAFLD、NASH和高脂血症模型小鼠； 9. 构建肝脏特异性的SIRT1转基因小鼠； 预期目标 的NAFLD、NASH和高脂血症模型小鼠的建立； 9. 完成肝脏特异Sirt1转基因小鼠的构建； 10. 明确胰岛源性因子和脂肪因子对肝细胞脂代谢的影响并初步阐明其机制； 10. 在培养细胞水平研究胰岛源性因子11. 证明代谢性炎症和高脂肪酸和脂肪因子对肝细胞脂代谢的影响； 11. 准备与本课题开展相关的其他特殊试剂和材料（腺病毒、siRNA等）； 12. 建立体外实验模型以及蛋白糖基化及榈酰化程度的检测方法，研究生理和炎症应激及高脂负荷状态下，脂肪细胞和肝脏细胞内FAT/CD36和脂滴包被蛋白表达及修饰调控。 通过上调肝脏FAT/CD36的基因表达及增加蛋白质修饰，导致FAT/CD36从胞浆向内质网和线粒体异常趋膜转移。 第 二 年 1. 针对病例-对照人群进行基因组甲1. 发现、验证中国成人和/或儿基化、乙酰化，以及microRNA表达谱分析，筛选与NAFLD及高脂血症相关的表观遗传因素； 2. 选择年龄、性别、饮食结构等因素匹配的成人、儿童病例－对照组，童罹患NAFLD、高脂血症的表观遗传因素； 2. 明确影响NAFLD和高脂血症发生、发展的膳食营养成分与易感基因的相关性； 验证发现的易感基因位点和/或表3. 确定不同膳食营养因素在观遗传因素； NAFLD和高脂血症发生、发年度 研究内容 3. 开展大样本前瞻性队列研究，观察预期目标 展及预防中的作用； 易感基因位点及其表观遗传修饰4. 识别、鉴定及评价不同阶段在NAFLD起病、进展、预后转归中的作用； 4. 分析影响NAFLD和高脂血症发NAFLD的生物标志物，明确具有预测价值的新的候选生物标志物； 生、发展的膳食营养成分与易感基5. 明确肝脏代谢性核受体过表因的相关性； 5. 人群队列生物标志物研究的的第一次追踪； 6. 开展病例-对照人群研究，结合动物模型研究，获得肝脏组织活检标本，利用分子生物学、蛋白组学、代谢组学等生物学检测方法，探究不同时期NAFLD的生物标志物； 7. 在模式动物如ob/ob小鼠、db/db达在NAFLD、NASH和高脂血症发生、发展中的作用； 6. 结合肝脏核受体基因敲除和静默的研究，明确代谢性核受体在肝脏糖脂代谢稳态调节中的作用及其机制； 7. 初步阐明FAM3家族蛋白在脂肪肝和高脂血症发生中的作用及其机制； 小鼠和高脂喂养ApoE-/-小鼠中，观8. 明确FAT/CD36异常表达和向察不同脂肪酸和糖对NAFLD和胰岛素抵抗发生、发展的影响； 8. 验证PRR-清道夫受体-JNK/NF-?B细胞膜和细胞器膜的转移；以及从胞浆向内质网的异常转运，导致肝脏损害的机制； 在代谢性炎症产生和放大中的作9. 在细胞水平阐明依赖于PRR用；同时通过基因和蛋白Array技术，发现新的脂质和炎症通路共同的 “sensor”； 9. 研究代谢性核受体肝脏过表达对NAFLD、NASH和高脂血症小鼠全身和肝脏脂代谢的影响； 10. 探讨核受体过表达肝脏组织（细的信号通路对代谢性炎症的发生及维持的调控作用及相关蛋白的翻译后修饰及表观遗传机制。