2011实验讲义

专业实验讲义

实验七 大蒜细胞SOD酶的提取和分离

一、实验目的

1．掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。 2．掌握SOD酶提取分离的一般步骤。 二、实验原理

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。

有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。

三、实验器材

研钵，石英纱，烧杯(50ml)，玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管。 四、试剂和材料

新鲜蒜瓣，0.05mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.8)，氯仿－乙醇混合液(氯仿：无水乙醇＝3:5)，丙酮(用前预冷至－10℃)。

五、操作步骤

整个操作过程在0～5℃条件下进行。 1．SOD酶的提取

称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞后(研磨20min，尽量使细胞破碎)，加入pH7.8、0.05mol/L的磷酸缓冲液(pH7.8)15ml，继续研磨20min，使SOD酶充分溶解到缓冲溶液中，然后5000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上清液。

2．去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿－乙醇混合液搅拌15分钟，5000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。

3．SOD酶的沉淀分离 粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，5000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。冷冻干燥后即得成品。

对成品进行称量并计算得率。

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专业实验讲义

实验八、橙油的制备

橙油是一类精油。橙油是橙皮中的腺体制造的精油。甜橙油（甜橙皮油）、苦橙油（苦橙皮油）、橙花油和无萜橙油的总称。天然香料大多然从植物中提取得到。植物天然香料有四种提取方法，即水蒸气蒸馏、压榨、浸提和吸收等方法。

一、实验目的：学习香料的基本知识和提取天然香料的实验方法。 二、实验原理

蒸馏法 芳香成分多数具有挥发性，可以随水蒸气逸出，而且冷凝后因其水溶性很低而易与水分离。因此水蒸气蒸馏是提取植物香料应用最广的方法。但由于提取温度较高，某些芳香成分可能被破坏，香气或多或少地受到影响，所以，由水蒸气蒸镏所得到的香料其留香性和抗氧化性一般较差。

三、原料：生姜，水，

四、仪器：烧瓶、恒压滴液漏斗、冷凝管、电热套等 五、实验操作 蒸馏法提取姜油

秤取生姜50g，洗净后先切成薄片，再切成小颗粒，放入250mL圆底烧瓶中，加水50mL和沸石2-3粒。在瓶上装有恒压滴液漏斗，漏斗上装接回流冷凝管。将漏斗下端旋塞关闭，加热使烧瓶内的水保持较猛烈地沸腾，于是水蒸气夹带着姜油蒸气沿着恒压漏斗的支管上升进入冷凝管。从冷凝管回流下来的冷凝水和姜油落下，被收集在恒压漏斗中，冷凝液在漏斗中分离成油、水两体。每隔适当的时间将漏斗下端旋塞拧开，把下层的水排入烧瓶中，姜油则总是留在漏斗中。如此重复操作多次，约经2-3h后，降温，将漏斗内下层的水尽量分离出来，余下的姜油则作为产物移入回收瓶中保存。

用松针、香芽草、胡椒、柠檬叶、按叶等等代替生姜，可得到相应的清油，只是收率各不相同。

六、思考题

1,植物天然香料通常有几种提取方法? 2,如何提高天然香料的产率?

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