植物组织培养实验指导

照射约20~30min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10min后，在打开日关灯。用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，点燃酒精灯，镊子和解剖刀在酒精灯火焰上炽烧片刻，待冷却后即可进行香蕉继代生芽接种。

②在酒精灯火焰旁打开香蕉芽的果酱瓶，用灼烧过的镊子取出3-5簇芽苗，放在灭过菌的碟子上，用解剖刀把每簇芽苗切成分别含有2-3个芽苗的小簇苗，然后再切去芽的尖端。

③用镊子将切好的芽苗插入继代培养基中，每瓶接种3-4个去掉芽顶端的小簇苗。封口后，熄灭酒精灯，瓶上贴上标签，注明姓名、接种日期及材料名称。 ④将上述接种的继代香蕉芽置于实验室的培养室内进行光照培养，并整理超净工作台台面。

五、实验结果及分析：一周后观察实验结果并在实验报告上详细写出观察结果并简单分析。 六、思考题：

1.香蕉芽苗的继代培养基配方为什么加入6BA和IBA？

2.接种时为什么要切除顶芽，为什么要2～3个小芽苗一起接种？

实验四 香蕉芽苗的诱导生根

一、实验目的：学习选用生根培养基对已经产生茎芽的植株进行诱导生根的原理及操作方法。

二、实验原理：通过在基本培养基中添加一定物质（活性碳或生长调节剂）来诱导香蕉芽生根，进而使其成为一个完整植株。 三、实验器材与试剂：

①器具：超净工作台、酒精灯、碟子、镊子、剪刀、解剖刀、标签纸、记号笔 ②75%乙醇

③香蕉芽诱导生根培养基：

1/2MS+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）+活性炭（1g/L）pH5.8-6.0 四、实验步骤：

①接种前，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯，照射约20~30min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10min后，在打开日关灯。用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，镊子和解剖刀在酒精灯火焰上炽

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烧片刻，待冷却后即可进行香蕉继代生芽接种。

②在酒精灯火焰旁打开香蕉芽的果酱瓶，用镊子取出带芽的小簇苗，放在灭过菌的碟子上，用解剖刀把每一个小芽分开。

③用镊子把每一个芽苗插入生根培养基中，每瓶可以接种3~4个芽苗。封口后，熄灭酒精灯，瓶上贴上标签，注明姓名、接种日期及材料名称。

④将上述接种的香蕉芽苗置于实验室的培养室内进行生根培养，并整理超净工作台台面。

五、实验结果及分析：2周后观察实验结果，查看香蕉芽苗的生根情况，详细记录在实验报告上并简单分析。 六、思考题：

1.香蕉芽苗的诱导生根的培养基配方为什么不加激素？培养基为什么可以用1/2MS?加入活性炭的目的是什么？

2.生根接种时，这次为什么不去除芽苗的顶端优势？

实验五、植物离体器官的快速繁殖（1）—培养基的配制

一、实验目的：通过植物离体器官的快速繁殖培养，掌握植物离体器官的快速繁殖的基本方法和过程。

二、实验原理：植物离体快速繁殖又叫微型繁殖，即把植物材料如茎尖、腋芽或叶片等放在培养容器内给予人工培养基和合适的无菌培养条件，达到短时间高速增殖植株的无性生殖技术。本次实验主要是利用母液法进行培养基的配制。 三、实验器材和试剂：

①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）药勺、称量纸、玻璃棒、移液管（10ml, 5ml, 2ml, 1ml,0.5ml,0.2ml）、电炉（1000W）、石棉网、吸耳球、酸度计或pH试纸（5.0~7.0）、三角瓶（50ml,100ml）或果酱瓶、耐高温高压的专用封口膜、线绳、冰箱、手提式消毒灭菌锅或卧式电压力灭菌锅

②试剂：蔗糖、琼脂、活性炭、1M HCl、1M NaOH；2,4-D、6BA等植物激素母液及MS基本培养基母液。 四、实验步骤： （1）培养基的配方

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本次实验自由分成若干小组，每组自己选择湛江市可以找到或买到的材料并根据自己选择的材料通过网上或相关组培书选择适合本组材料的培养基，然后通过母液法进行配制，每组大约配制0.5L培养基。 （2）培养基的配制

①首先，将所需的各贮存母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿，量筒、烧杯、移液管、玻璃棒等放在相应的位置。然后，根据所需配制的培养基用量，按照下面的公式及所需的各种母液的扩大倍数，分别计算需吸取各母液的数量（ml）。 吸取量=需要配制培养基的体积×需要配制浓度/母液浓度

② 取1L大烧杯一只，用量筒或移液管分别吸取各母液（注：各母液移液管不能混用）。倒入500ml蒸馏水，然后准确称量琼脂及蔗糖，最后定容至1L，放在电炉或微波炉内煮沸，待琼脂完全溶化。

③ 用1mol/LHCl或1mol/LNaOH将培养基pH值调节至5.8~6.0。用酸碱调节pH值时，应用玻璃棒不断搅拌后，再用pH试纸或pH计测试培养基的pH值。 ④ 将培养基分装入相应的果酱瓶中，每瓶大约20~30ml，盖上盖子，贴上标签。用记号笔注明培养基名称、配制时间及配制者姓名，待灭菌用。

⑤ 培养基的灭菌：把分装好的培养基及其他需灭菌的各种器具和蒸馏水等，放入灭菌锅的消毒桶中，放入锅中。按实验一的灭菌步骤操作。

五、 结果与分析：1周后观察培养基凝固状态及颜色，如果不成功，分析原因，自找时间重新配制。 六、思考题：

1.根据的培养基配方，说明为什么要用该种培养基，如果加了激素，为什么加入该激素，作用是什么？

2..灭菌锅灭菌过程中什么情况下应该手动放气？为什么？

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实验六、植物离体器官的快速繁殖（2）—外植体的接种

一、实验目的：通过植物离体器官的快速繁殖培养，掌握植物离体器官的快速繁殖的基本方法和过程。

二、实验原理：植物离体快速繁殖又叫微型繁殖，即把植物材料如茎尖、腋芽或叶片等放在培养容器内给予人工培养基和合适的无菌培养条件，达到短时间高速增殖植株的无性生殖技术。本次实验主要是进行外植体的接种。 三、实验器材与试剂：

①材料： 新鲜的植物材料—叶片或茎段

②试剂及培养基：0.1%HgCl2（剧毒！小心使用） 、2%次氯酸钠或10%次氯酸钙、75%乙醇、无菌水 该材料的培养基：

MS++蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）+激素 pH5.8-6.0

③器具：超净工作台、酒精灯、烧杯、镊子、剪刀、解剖刀、无菌水吸水纸、标签纸、记号笔 四、实验步骤：

①接种前，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯，照射约20~30min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10min后，在打开日关灯。用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，点燃酒精灯，镊子和解剖刀在酒精灯火焰上炽烧片刻，待冷却后即可进行外植体的消毒和接种。

②将植物材料的叶片或茎段在自来水下冲洗干净，用解剖刀切去外围组织，切成8~10cm小块分别置于100ml烧杯中，用75%酒精浸泡30S后，移入0.1%氯化汞溶液浸泡10min，然后在超净台内用无菌水冲洗4次，沥干水后，置于灭菌处理过的碟子中，用消毒的镊子和解剖刀将植物材料横纵切成0.5cm2的小块。以上操作都要在酒精灯火焰旁进行。

③在酒精灯旁边打开培养基瓶盖，用无菌的镊子，将材料小块接种在培养基中，每瓶接种3~4块，封口后，熄灭酒精灯，瓶上贴上标签，注明姓名、接种日期及材料名称。

④将上述接种有植物材料的外植体培养瓶置于实验室的培养室内进行培养，并整理超净工作台台面。

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五、实验结果及分析：1周后观察污染情况，2周后观察生长情况，做好实验记录详细写在实验报告上并简单分析。 六、思考题：

1.根据你的材料的接种方式,说明你为什么采用该器官进行接种？

2.你的材料灭菌后为什么还要切割？切割时每个外植体切割成多大的才最合适？

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宛淑艳 修订