实验室常用试剂配方

实验室常用试剂配方 1.常用PBS：称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可，高压灭菌。

2.常用PBS(不含K盐)：8.5g NaCl、0.8736g NaH2PO4?2H2O、5.531g Na2HPO4?12H2O，

800ml三蒸水搅拌，无需调PH，1L定容。

3.DMEM培养基：DMEM干粉溶入800ml三蒸水中，加入3.7g NaHCO3，搅拌后调PH至7.2~7.4，最终用1000ml容量瓶定容，无菌层流间中过滤分装。

4.1640培养基：1640干粉溶入800ml三蒸水中，加入2.0g NaHCO3，搅拌后调PH至7.2~7.4，最终用1000ml容量瓶定容，无菌层流间中过滤分装。

5.胰酶：浓度为0.25%~0.4%，通常是用生理盐水或PBS等平衡盐溶液作为溶剂。

6.胰酶（含EDTA）：普通胰酶中额外加入0.01%~0.02%的EDTA

7.细胞冻存液：多数细胞配方为10%DMSO+20%血清+70%细胞培养基，也有介绍直接10%DMSO加90%含血清培养液，部分细胞需10%DMSO+90%血清。理论上血清越多冻存效果越好。

8.谷氨酰胺：标准的谷氨酰胺100×液为200mmol/L(29.22g/L)。通常培养液中浓度为1~4mmol/L（0.146~0.5844g/L），4o

C下半衰期为7天，两周以上需要重新加入。

9.双抗：青霉素—100IU/ml（通常培养液中终浓度为20~100IU/ml均可），链霉素—100ug/ml（通常培养液中浓度为50ug/ml）。多数体外培养都是使用青霉素和链霉素，上述的工作浓度可在37oC长时间控制轻度污染而对细胞无毒性作用。

10.MTT：0.5克MTT，溶于无酚红的培养基中（就用培养细胞的培养基），浓度为5mg/ml，过滤除菌，4℃ 避光保存。在配制和保存的过程中，容器最好用黑纸包住。保质期为两周。

11.台盼蓝染色液：称取2g台盼蓝，加入少量双蒸水研磨粉碎后，加水至50ml，离心取上清，加入1.8% Nacl溶液至100ml,即成工作液。

12.苏木精染液：1.药品：苏木精2g，硫酸铝5g，碘酸钾（钠）0.2g，乙醇（95%、100%）250ml，蒸馏水750ml，丙三醇50ml，柠檬酸0.3g。

2.方法步骤：①将硫酸铝溶于蒸馏水中，成为饱和的A液；②将苏木素溶于乙醇中，充分摇匀为B液;③A液与B液混合使其均匀;④将氧化剂碘酸钾（钠）加入到混合液中，充分摇匀；⑤放置5分钟后，依次加入丙三醇（中和剂）和促染剂柠檬酸，再震荡数分钟，放置过夜后即可使用。 13.多聚甲醛：4g多聚甲醛+100ml生理盐水，在60o

C水浴加热并搅拌，逐滴加入1mol/L的NaOH至溶液突然澄清，调PH至7~8，普通滤纸过滤，4o

C备用。

14. 10%福尔马林:10ml甲醛溶液+90ml蒸馏水，混匀 琼脂糖凝胶电泳相关试剂

15. 5×TBE贮存液：配制1000 ml: Tris 54g ,硼酸27.5g ,0.5 mol/L EDTA 20 ml,定容至1000ml,调PH=8.0

16. 0.5×TBE使用液：取 5ml 5×TBE贮存液，加入45ml双蒸水，混匀

17. 1％（1.5％）凝胶配制：锥形瓶中加入45ml（60ml） 0.5×TBE缓冲液，称取0.45g(0.6g)琼脂糖放入锥形瓶中，置微波炉中2min中火加热至完全融化，取出摇匀。

Western Blot相关试剂

18. 30%储备胶（丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺）：29g丙烯酰胺、1g甲叉双丙烯酰胺，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，于密闭棕色瓶中4℃中保存。（神经毒剂，必须戴手套口罩） 19. Tris?HCl（分离胶缓冲液，PH8.8）：Tris 18.15g溶于三蒸水，浓盐酸调PH至8.8，定容至100ml,40C保存一个月。 20. Tris?HCl（浓缩胶缓冲液，PH6.8）：Tris 6.05g溶于三蒸水，浓盐酸调PH至6.8定容至100ml,40C保存一个月。 21. 10%SDS：10gSDS溶于三蒸水中，定容至100ml，68°助溶

22. 染色液：考马斯亮蓝R-250 0.1g,加甲醇（或者乙醇）40ml(或50ml),冰醋酸10ml搅拌彻底后过滤，置于棕色饼中。

TEMED：成品TEMED。

23. 转移缓冲液：SDS 1g、Tris 3.03g、甘氨酸 14.42g，加双蒸水溶解后，加甲醇200ml，用双蒸水定容至1L，4℃保存。 24. 10%过硫酸铵溶液（AP）： 0.1g过硫酸铵溶于1ml三蒸水中，现用现配。

25. 转膜缓冲液：SDS 0.37g、Tris 5.8g、甘氨酸 2.9g，溶于三蒸水中，200ml甲醇，定容至1000ml

26. TBST： Tris 3g，NaCl 8g，KCl 0.2 g (可加可不加)，三蒸水溶解， 定容至1000ml, 浓盐酸调PH为7.4 27. TBS：TBS中加入0.1%的吐温-20 28. 0.1%BSA: TBST 100ml + 0.1g BSA 29. 封闭液：0.5g脱脂奶粉+10mlTBST 30. LB液体培养基：胰蛋白胨(Tryptone) 10g、

酵母提取物(Yeast extract) 5g、氯化钠(NaCl) 5g，定容至1L，用NaOH调pH至7.0~7.2，121℃灭菌20min备用 31. LB固体培养基：往楼上的液体培养基中额外加入1.5g琼脂，121℃灭菌20min备用

32.无Ca2+

、Mg2+

hanks液：NaCl 4.5g、KCl 0.2g、NaHCO3 0.175g、Na2HPO4·12H2O 0.076g、KH2PO4 0.03g、葡萄糖 0.5g、0.4%酚红 2.5ml、将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。