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在柱顶上装上玻璃标口塞接头,用铁夹压紧(防加压时接头冲开),小心开启空压机阀门,再开针形阀和空气过滤减压器,(注意:压力过大。玻璃柱会炸,一般2kg是安全的,必要时可戴防护面罩)调动所需压力,控制流速1ml/分,每10分钟左右一管,收至洗脱剂全部流出为止,洗脱全过程约3小时。
(4)检查:各流份分别移入小玻璃蒸发器中,于水浴上浓缩,分别通过TLC检查,吸附剂:硅胶G,展开剂:环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6:3:1,在紫外灯下观察。
四、实验现象:在本次试验中,我们组洗脱得到的样品有7管。分别标注为1、2、3....7。经过TCL检查,在紫外灯下观察,1、2管都是没有出现点的。从第3管开始到第6管都可以看到点,但是整个过程中就只有一个点,到第7管点又消失了。
2~7号管的TCL记录图 3号管在紫外灯下(照片拍得比较模糊) 五、讨论与分析:在本实验中,我们最后得到的白色沉淀(以汉防己甲素、乙素为主)的量比较少,究其原因是在对酸水溶液碱化那一步骤碱化得不够彻底,调pH大概为9(应调pH为10),不能把尽量多的生物碱给游离出来,导致最终的产品的量很少。在对产品进行TCL检查时,发现实验室里很多人都没有得到第二个点,由此至终就只能看到一个点。经过分析,可能的原因有:(1)展开剂极性不够,不能把样品分离开来。应选用其他展开剂。(2)样品的量很少,与洗脱剂形成的溶液浓度太低,再加上爬板的时候又被稀释,导致因成分浓度过低观察不到。应该注意的地方是爬板时点的样品溶液要尽量多些,要不在展开剂的稀释下,可能会观察不到现象。
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