植物提取实验

2）取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。

3）取薯蓣碎块0.5g于小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟，滤液供鉴别。 2．鉴别试验：

（1）泡沫试验：薯蓣浸液，皂角浸液各2ml，分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置，在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生？

（2）醋酐浓硫酸试验：皂角浸液5ml，于蒸发皿中在水浴上蒸干，加入1ml醋酐使其溶解，滴于干燥比色盘中，从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴，观察颜色变化。另取薯蓣浸液5ml，置于蒸发皿中，在水浴上蒸干，加入1ml醋酐溶液，并倾入比色盘中，（试管）沿管壁加入几滴浓硫酸，观察界面间是否有紫红色环产生？ 3. 实验现象：

现象 泡沫试验 产生的泡沫很多， 且一直持续着产生 醋酐浓硫酸试验 皂角浸液：渐渐变红紫色 薯蓣浸液：界面间有紫红色环生成 4、讨论与分析：从上述的现象中可知，现象都比较明显，因此可以推出皂角、薯蓣都含有皂苷。

（五）氰苷的鉴别

1. 实验步骤：取苦杏仁1.51g，研碎，置50ml锥形瓶中加入3ml 5%硫酸溶液，充分混合，塞好，进行以下反应。

（1）苦味酸钠试验：取滤纸条先滴加饱和苦味酸液侵润，稍干后，再滴加10%碳酸钠1~2滴润湿，干后，悬于上述锥形瓶中，在水浴上加热10分钟，滤纸渐变为橙色或砖红色。 （2）取滤纸条先滴加3~4滴愈创木树酯醇溶液润湿，干后，再滴加1%硫酸钠液3~4滴润湿后，悬于同一锥形瓶中，放置，滤纸条渐变为鲜兰色（放置过入色渐褪）。

（3）亚铁氰化铁反应：另取苦仁0.54g研碎，放入试管中，加水1~2滴润湿（切勿过量），立即用已被10%NaOH试剂1滴湿润的滤纸条悬于管口置50℃水浴上约10分钟，将滤纸取出，于滤纸上加10tSO4液1滴，加10%HCl1~2滴及1tCl3，试液1滴即显兰色。 2. 实验结果： 反应 现象 苦味酸钠试验 滤纸渐变为砖红色 愈创木树酯醇溶液滤纸条 滤纸条渐变为鲜兰色， 放置过入色渐褪 亚铁氰化铁反应 滤纸条变兰色 3. 讨论与分析：从上述现象中可知，各个鉴定反应现象非常明显，因此杏仁中含氰苷。 三、挥发油的定性鉴别 1. 实验步骤：

（1）取各种挥发油（松节油、薄荷油、丁香油）观察其色泽，是否有特殊香气。

（2）挥发性：取滤纸一小块，滴加薄荷油一滴，放置2小时或微热后观察滤纸上有无油迹 （3）pH检查：取样品一滴加乙醇5滴，以预先用蒸馏水湿润的广泛pH试纸进行检查，如显酸性，示有游离的酸或酚类化合物。

（4）FeCl3反应（检酚类）：取样品一滴，溶于1ml乙醇中，加入1%得FeCL3醇液1~2滴，如显蓝紫或绿色，示有酚类。

（5）苯肼试验（检酮、醛类）

取2，4—二硝苯肼试液0.5~1ml，加1滴样品的无醛醇溶液，用力振摇，如有酮醛化合物，应析出黄一橙红色沉淀，如无反应，可放置15min后再观察之。 2. 实验现象：

松节油 薄荷油 丁香油 颜色 无色 浅黄色 红棕色 是否有特殊香气 有 有 有 挥发性 强 强 强 pH检查 pH=5，弱酸性 pH=4~5，弱酸性 pH=4~5，弱酸性 FeCl3反应 无颜色变 化，无酚类 无颜色变 化，无酚类 显墨绿色， 有酚类 苯肼反应 无明显变化，无 酮醛化合物 无明显变化，无 酮醛化合物 有黄橙色沉淀生 成，有酮醛化合物 四、鞣质类化合物的鉴别 1．检品溶液的制备：

取五倍子（含可水解鞣质），儿茶（含缩合鞣质），没食子酸（鞣质水解产生伪鞣质）少量（约0.1克）分别置大试管中，加蒸馏水约10ml，加热煮沸，过滤，滤液作以下试验： 2．鞣质的一般反应（鞣质与伪鞣技的区别鉴定）

（1）感观试验：取制备的鞣质和伪鞣质溶液，尝其味，用石蕊试纸检查溶液是否呈酸性反应。 （2）三氯化铁反应：取制备的鞣质溶液（五倍子溶液或儿茶溶液）及食子酸溶液各1~2ml ，分别加入三氯化铁试液,鞣质产生绿色或兰黑色反应或沉淀;伪鞣质产生兰色反应。

3．可水解鞣和缩合鞣质的区别鉴定

（1）鞣红反应：取五倍子浸液（含可水解鞣质），儿茶浸液（含缩合鞣质）各2ml，分别加盐酸0.5ml，加热煮沸30分钟左右放冷。可水解鞣质不发生沉淀，缩合鞣质有红色沉淀产生。 （2）三氯化铁反应：取五倍子浸液及儿茶浸流各1~2ml，分别加入三氯化铁试液数滴，可水解鞣质显兰色或黑兰色反应，缩合鞣质显黑绿色反应。

（3）醋酸溶液中与醋酸铅反应：取五倍子浸液及儿茶浸液各1~2ml，分别加醋酸液数滴，摇匀后再分别滴加醋酸铅溶液数滴，可水解鞣质产生絮状沉淀，缩合鞣质无沉淀产生。 4. 实验现象： 4.1 鞣质的一般反应：

酸碱性 三氯化铁的反应 五倍子 酸性 生成兰黑色沉淀 儿茶 中性 生成绿色沉淀 没食子酸 酸性 生成兰色沉淀 4.2 可水解鞣和缩合鞣质的区别鉴定：

五倍子浸液 儿茶浸液 鞣红反应 开始时有沉淀生成，后来沉淀消失，溶液变澄清 有沉淀生成，且沉淀 不会随时间而消失 三氯化铁反应 显兰色反应 显棕色反应 醋酸溶液中与 醋酸铅反应 产生絮状沉淀 无明显沉淀生成

实验三 粉防己生物碱的提取分离与鉴定

一、目的要求

1． 通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握生物碱的一般提取方法。 2． 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定 二、已知生物碱的结构和性质

汉防己为防己科千金藤属物的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。 1．汉防已甲素（汉防已碱，粉防已碱）：无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。

OCH3NCH3HOROOOCH3CH3ONHCH3R=CH3 R=H汉防己甲素汉防己乙素

2．汉防已乙素（又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）：溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同。

3．轮环藤酚碱：为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。

CH3ONOHCH3OHHOOCH3

三、生物碱的提取分离

1．总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离

注一：往300ml蒸馏水中滴加一滴浓硫酸，再把酸水液倒入药品粉末中至刚好浸没样品（大概100ml），搅拌静置30min，过滤取滤液。

注二：净砂必须事前洗净烘干，以沉淀与净砂的质量比为1:2加入净砂，并混匀。

注三：先将提取器内滤纸筒取出。然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾出（另器贮存），再将提取玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶中乙醚于玻筒中，至烧瓶内的乙醚提取液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。 2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素

低压柱层析在低压下（0.5~3kg/cm，一般0.3~1.2 kg/cm）采用颗粒直径介于经典柱层析（100~200μm）和HPLC（~37μm）之间的薄层层析用硅胶G（50~75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。适宜和于天然产物的常量制备性分离。

（1）装柱 层析柱规格：柱长30cm，内径2cm，共装硅胶约30g（高约22cm）。 （2）拌样加样 把实验产品的白色沉淀加少量丙酮热溶（刚溶为度），加入1.5g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2cm高的空白硅胶，再加盖一园形滤纸片，压紧。

（3）洗脱 先检查从空压机至层析柱各阀门管道是否正常，关紧各个阀门，开动空压机至额定压力（5.8kg/cm2）待用。用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂（环已烷-惭酸乙酯-二乙胺/6：2：0.8），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（共约250ml），迅速

2

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在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（防加压时接头冲开），小心开启空压机阀门，再开针形阀和空气过滤减压器，（注意：压力过大。玻璃柱会炸，一般2kg是安全的，必要时可戴防护面罩）调动所需压力，控制流速1ml/分，每10分钟左右一管，收至洗脱剂全部流出为止，洗脱全过程约3小时。

（4）检查：各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过TLC检查，吸附剂：硅胶G，展开剂：环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，在紫外灯下观察。

四、实验现象：在本次试验中，我们组洗脱得到的样品有7管。分别标注为1、2、3....7。经过TCL检查，在紫外灯下观察，1、2管都是没有出现点的。从第3管开始到第6管都可以看到点，但是整个过程中就只有一个点，到第7管点又消失了。

2~7号管的TCL记录图 3号管在紫外灯下（照片拍得比较模糊） 五、讨论与分析：在本实验中，我们最后得到的白色沉淀（以汉防己甲素、乙素为主）的量比较少，究其原因是在对酸水溶液碱化那一步骤碱化得不够彻底，调pH大概为9（应调pH为10），不能把尽量多的生物碱给游离出来，导致最终的产品的量很少。在对产品进行TCL检查时，发现实验室里很多人都没有得到第二个点，由此至终就只能看到一个点。经过分析，可能的原因有：（1）展开剂极性不够，不能把样品分离开来。应选用其他展开剂。（2）样品的量很少，与洗脱剂形成的溶液浓度太低，再加上爬板的时候又被稀释，导致因成分浓度过低观察不到。应该注意的地方是爬板时点的样品溶液要尽量多些，要不在展开剂的稀释下，可能会观察不到现象。