松材线虫病防治技术方案（修订版）

将取回的样品在室内采用贝尔曼漏斗法或浅盘法进行线虫分离，分离时间一般需12小时以上。将分离液体收集到试管或烧杯中，通过自然沉淀或离心后进行镜检。

2、线虫培养

（1）疫木保温保湿培养：将样品锯成小段，置于烧杯中加少量清水，木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖，在30℃条件下保温保湿培养3天，倒取杯中水液，可获得较多雌雄成虫；或将样品木段适当浸湿，放于塑料袋里，扎紧袋口，置于30℃培养箱中3天取出重新分离，可获得较多雌雄成虫。

（2）单异活体培养：制备马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基（PDA）平板。用盘多毛孢（Pestalotia spp.）或镰刀孢（Fusarium spp.）或灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养线虫。无菌条件下将多毛孢或镰刀孢或灰葡萄孢接种在PDA平板上，置于25℃－28℃恒温培养4－5天，菌丝长满平板时接种线虫。多毛孢或镰刀孢在30℃恒温条件下保湿培养线虫，接种20条幼虫，48小时即可分离鉴定，线虫量少时可相应延长培养时间。灰葡萄孢在25℃恒温培养线虫，培养时间要加长1－3天。

3、玻片的制作

（1）临时水玻片的制作：在洁净的载玻片中央滴一水滴，水滴的量以加盖玻片后恰好充满盖玻片下的空间为好。用细针挑取，或用毛细滴管吸取线虫置于载玻片的水滴中，并使之沉底。将有线虫的载玻片在酒精灯的火焰上往返通过5－6秒，杀死线虫。用细针摆好水滴中的死线虫，然后用镊子夹盖玻片从一侧轻轻盖下。

（2）半永久玻片的制作：将分离所得的线虫液，转移至离心管中，2000转/分离心3分钟。吸去上部清水并保留底部3－4毫升线虫液，置于53℃热水中15分钟杀死线虫，待冷却后，加入等体积的TAF液固定48小时以上。再用上述方法再离心，用微量移液器吸取离心管底部线虫液，滴加进装有2 毫升棉蓝－乳酚油的钟面皿中，置恒温烘箱中45℃脱水24小时。

在载玻片上加上封片蜡圈，用挑针加一小滴甘油于蜡圈中心位置。解剖镜下挑取脱水后的目标线虫于甘油中，使其沉底并位于甘油滴中心位置。在封片蜡圈上放置盖玻片，转移至控温电热平板上，保持75℃使蜡完全融化，取下并自然冷却后用透明指甲油加封一次。

4、鉴定

（1）常规显微镜形态鉴定（仅适用于雌雄成虫，以雌成虫为主）：将制作好的玻片置于显微镜下观察其形态，判别是否为松材线虫。

注：松材线虫分离、培养、镜检技术操作规程参见国家标准《松材线虫病检疫

技术规程（GB/T 23476—2009）》

（2）分子检测（适用于各虫态）：松材线虫的分子检测技术采用实时PCR检测技术，操作规程见附录2。所需仪器和试剂可与国家林业局危险性林业有害生物检验鉴定技术培训中心联系。

二、疫情报告、公布与撤销 （一）疫情确认

1、新发现疫情的省（区、市），疫情鉴定以国家林业局全国危险性林业有害生物检验鉴定技术培训中心或国家林业局林业有害生物检验鉴定中心鉴定结论为准，由国家林业局最后确认。

2、新发现疫情的县级行政区，疫情鉴定以省级以上森防部门或国家林业局认可的专家鉴定结论为准，由省级林业主管部门最后确认。

（二）疫情报告

1、普查结果报告：春季普查报告应在5月份、秋季普查报告应在11月份报告国家林业局；报告中应附年度松材线虫病监测普查统计表和年度松材线虫病发生情况统计表。

2、月报告：各省（区、市）森防机构定期以电子邮件和书面形式同时向国家林业局森防总站报送松材线虫病除治工作进展情况。实行定期除治（集中在秋季普查后至翌年松褐天牛羽化前开展疫木除治）的，每月报送一次；实行常年除治的，每季度报送一次。疫情监测情况每月报送一次。

3、新发疫情报告：在疫情监测中，一旦经技术鉴定证实新发现松材线虫病，当地林业主管部门应在一周内逐级将发生地点、发现日期、林分状况、发病面积、病死树数量等报告国家林业局和当地人民政府。

（三）疫情公布

国家林业局根据全国松材线虫病疫情调查结果，每年正式以公告或新闻发布会等形式公布松材线虫病疫情信息。

（四）疫情撤销

1、当疫情发生区通过有效手段根除疫情后，由国家林业局以公告或新闻发布会等形式宣布该地解除疫情。

2、撤销疫情应满足下列条件之一：

——通过有效手段根除后，分布区中没有松材线虫的寄主植物。

——通过有效手段根除后，连续3年疫情普查监测中没有发现松材线虫。 三、防治措施

（一）规划设计

1、各省（区、市）林业主管部门根据国家林业局的总体部署和本省（区、市）松材线虫病秋季普查结果，制定本省（区、市）松材线虫病防治方案。

2、各县级疫情发生区根据本省（区、市）松材线虫病防治预案，结合本地松材线虫病传播规律、发生区的地理位置、林分用途、发生面积、危害程度等因素，以县级行政区为单位，进行防治作业设计。作业设计要划分不同治理类型，实行分类施策，分区治理。内容包括不同类型区的特点、范围、面积、治理对策和技术措施。面积、技术措施和工程量要落实到林业小班，并绘制施工作业图、表和文字说明。

3、防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外延伸一定范围作为缓冲区。缓冲区按发生区处理。

4、省级防治预案应通过专家论证，并报国家林业局审批；县级防治作业设计应通过省级（或逐级）审批。

（二）疫木除治 1、皆伐

适用范围：需要尽快根除的疫点，如孤立疫点、新发生疫点、区域位置重要的疫点等。此外，在病死树率高并且松林无保存价值的地方（或松树数量不占主要比例的混交林）也可采用。

作业要求：防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外至少延伸100米。在松褐天牛成虫羽化前由外向内皆伐所有松材线虫的寄主植物，所有伐除的病死树、活树、直径超过1厘米的枝条均须作除害处理，并应在松褐天牛成虫羽化前完成；在操作允许的条件下，病死木伐桩高度不得超过5厘米。

2、疫木清理

适用范围：自然保护区和重要风景林区及其他特殊用途松林等必须保留松树的林份、大面积松林且连片发生无法短期内彻底根除疫情的地方。

作业要求：防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外至少延伸2000米。在松褐天牛成虫羽化前（松褐天牛一年一代的地区为10月至翌年4月；松褐天牛一年两代的地区为7至8月和11月至翌年3月）由外向内伐除包括病死松树、疑似感病木、衰弱木、受压木、风折木、旱死木、雪压木、当年枯死或已经萎蔫的侧枝以及各种人为乱砍滥伐的松树枝、干及伐桩等，所有伐除的松木及直径超过1厘米的枝条均须作除害处理，并应在松褐天牛成虫羽化前完成；在操作允许的条件下，伐桩高度不得超过5厘米。

注意事项：我国松材线虫病造成的松树枯死存在越年病枯死现象，因此在松褐天牛羽化前应对防治作业区出现的枯死松树再清理一次。

注：松材线虫病疫木清理技术操作办法参见林业行业标准《松材线虫病疫木清理技术规范（LY/T1865—2009）》

3、疫点封锁

适用范围：病害发生面积大，危害严重，实施皆伐或清除感病木难度大，且不会造成疫情自然扩散的地区可采用全面疫点封锁措施。

作业要求：禁止砍伐疫点内所有寄主植物，包括枝条。 4、伐桩处理

病死木砍伐后伐桩可选择如下方法之一进行除害处理： ——伐桩全部连根挖出后集中除害处理。

——枯死松树的伐桩全部去皮后喷16%喹硫磷·丁硫克百威乳油1∶100倍液至伐桩湿透（或磷化铝1－2粒），再加套0.8毫米以上厚度的塑料农膜袋并在四周压土。也可使用国家林业局推荐的其他药剂。 （三）松褐天牛防治 1、设置诱木防治

适用范围：采用疫木清理措施的松林。

作业要求：在发生区内选择衰弱或较小的松树作为诱木引诱松褐天牛集中在诱木上产卵，每10亩设置一株，并用GPS定位。于松褐天牛羽化初期，在诱木基部离地面30－40厘米处的3个方向侧面，用刀砍3－4刀（小树可少些），用注射器把引诱剂注入刀口内。诱木引诱剂使用浓度为1∶3（1份引诱剂原液用3倍清水稀释）。施药量（毫升）大致与诱木树干基部直径（厘米）树相当。于每年秋季将诱木伐除并进行除害处理。或直接在林间放置新鲜松木段引诱松褐天牛集中在诱木上产卵，待产卵期后集中除害处理。

注意事项：禁止在疫情发生林分边缘使用，防止疫情向外扩散蔓延，同时要加强诱木管理，严防诱木流失。

2、化学药剂防治

适用范围：所有松材线虫病发生区。

作业要求：防治作业区以实际发生林分边缘为基准，向外至少延伸2000米。使用噻虫啉（也可使用国家林业局推荐的其他药剂）在松褐天牛羽化初期和第一次药剂有效期末连续2次采取飞机，或地面喷药进行松褐天牛防治。使用药剂和方法见附录3。或在松褐天牛幼龄幼虫期，对树干喷洒16％喹硫磷·丁硫克百威乳油80