生物质谱在蛋白质组学研究中应用

结论

一、通过整体蛋白质两维色谱预分离和毛细管反相液相色谱－质谱鉴定方法联用，离子阱质谱鉴定出478个胎肝蛋白质， Q/TOF质谱鉴定出319个胎肝蛋白质，总计797个胎肝蛋白质，其中确定的线粒体蛋白质接近20%，在国内外人胎肝线粒体蛋白质组表达谱构建中首次分离鉴如此之多的蛋白质，表明实验设计和技术路线是可行的；

二、实验中发现蛋白质的疏水性、pI值、样品缓冲液以及数据库的选择等都会对最终的检出结果有影响，因此在进行实验及结果处理时值得注意。

反相色谱－SDS-PAGE-串联质谱分析技术

样本制备方法：

称取成人肝脏组织样品0.1g，加入提取液（8.0M脲，2.0％SDS）2.0mL，超声(超声0.5s,停2s，60次)溶解后，离心分离（15000g，40min），取上清备用。

反相色谱分离人肝脏蛋白质混合物色谱图

A, 第1次制备；B，第32次制备

色谱条件：150mm×4.6mm i.d., C8，5?m，30nm; 流速： 0.75mL/min; 检测波长：214nm；非线性溶剂梯度：100%A (5% aqueous acetonitrile plus 0.1%TFA)～10%B(95% aqueous acetonitrile plus 0.1%TFA), 10min; 10%B～35%B,10min; 35%B～75%B,40min; 75%B～100%B，8min; 100%B， 5min 100％B ~ 100%A, 3min; 平衡 32min后进行下一次分离。

90中第24条蛋白质带的总离子流色谱图（A）、相应的 一级质谱图（B）和m/z：809离子的串联质谱图（C）

实验结果和讨论

馏分