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18O标记肽段在IPG路线中的稳定性远远高于 在SCX路线中的稳定性.
(5)18O标记磷酸化肽段在TiO2分离富集路线中稳定性的考察
18O:16O=1:1的样本脱盐及TiO2富集标记值基本不变
通过以上的实验条件的优化,确定了18O-IPG-IEF-TiO2-LTQ-FT用于磷酸化蛋白质组学相对定量分析的技术路线,该技术路线已经用于HepG2/HepG2-HBx细胞模型的磷酸化蛋白质组定性及定量研究。
七、蛋白质组学研究面临的主要技术挑战
1、高丰度蛋白质的去除低丰度蛋白质的有 效富集与识别;
2、高效分离技术和高灵敏度检测方法的建立; 3、与功能密切相关的翻译后修饰和蛋白质变 体(variant)信息的获得;
4、高通量鉴定中的判据以及假阳性和假阴性 问题;
5、绝对和相对定量蛋白质学技术平台的建立。
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