山东省烟台市、菏泽市2019届高三生物5月适应性练习试题(一)(含解析)

入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

3、动物细胞培养的过程：取动物组织块——剪碎组织——用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞——制成细胞悬液——转入培养液中（原代培养）——放入二氧化碳培养箱培养——贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞制成细胞悬液——转入培养液（传代培养）——二氧化碳培养箱。

【详解】（1）重叠延伸PCR技术是一种基因的定点突变技术。限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。XhoI限制酶识别的序列及位点是5-CTCGAG-3中的C、T位点。所以若透明质酸酶基因上的一段核苷酸序列为“-ATCTCGAGCGGG-”，则对该段核苷酸序列进行剪切的XhoI酶识别的核昔酸序列为-CTCGAG- 或 -GAGCTC- 。

（2）表达载体的构建一般含有特殊的标记基因，其含有的标记基因的作用是便于重组DNA的鉴定和选择。DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来，所连接的DNA两端碱基序列没有专一性要求。用毛霉或酵母菌替代大肠杆菌作为受体更具有优势，是因为毛霉和酵母菌为真核生物，有对目的基因表达产物进行加工的内质网和高尔基体，产生的透明质酸酶是具有生物活性的。

（3）动物细胞培养时先取出动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织），再剪碎，再用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间使其分散成单个细胞。链球菌等致病菌在侵染人体时，可产生多种酶，如透明质酸酶等，能溶解细胞间质的透明质酸、纤维蛋白和其他蛋白质，破坏纤维所形成的脓肿壁，这样能破坏宿主的防御系统，利于致病菌入侵。

【点睛】本题的难点在于理解重叠延伸PCR技术。重叠延伸PCR是一种定点突变技术，对比突变前后的透明质酸酶基因可以看出，其基因内部的NcoI限制酶的识别位点消失，而基因端部的NcoI限制酶的识别位点没变，其目的是用NcoI限制酶切割DNA获取透明质酸酶基因时，避免基因内部被切割，以获得完整的目的基因。其次理解限制性核酸内切酶只能切割特定序列的特定位点也是解答本题的关键。

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