课题6 血红蛋白的提取和分离

课题6 血红蛋白的提取和分离

一、学习目标

1.掌握《血红蛋白提取和分离》的基本过程和方法，细化过程，关注注意事项，要能够用精简准确的语言描述全过程；

2.特别掌握凝胶色谱法、缓冲溶液和电泳的操作原理和实际应用。 二、知识过关

1.凝胶色谱法：也叫做 。是指 不同的蛋白质分子，在通过凝胶的过程中，因有些要进入凝胶颗粒，有些不进入凝胶颗粒，导致移动的路径不同，而导致 不同，进而将不同的蛋白质彼此分开的有效方法。 2.凝胶的成分是什么？凝胶颗粒本身有何特征？

3.相对分子量较小的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒 内部而被滞留，相对分子量较大的蛋白质被阻挡在凝胶颗粒外面，在颗粒间迅速通过。

4.缓冲溶液的缓冲作用体现在哪里？请写出维持血液PH稳定的两对缓冲物质。

5电泳：在一定的 下，带电粒子在 的作用下，因 、 和 的不同，使带电分子产生不同的迁移方向或 ，从而实现样品中各种分子的分离。

6.常用的电泳方法有哪两种？测定蛋白质分子量时通常使用 电泳。 聚丙烯酰胺凝胶具有 结构。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率主要取决于它所带 的多少和 。为了消除 对迁移率的影响，可以再凝胶中加入SDS（十二烷基硫酸钠）。SDS能够使蛋白质发生 。SDS所带电荷可以掩盖不同蛋白质间的 差别，使电泳迁移率完全取决于 。

7.蛋白质的提取和分离一般分为哪四个步骤？

8.细胞组成中，除 以外，约 %是血红蛋白。血红蛋白由 条肽链组成。血红蛋白因含有 而呈现红色。

1

思考：本课题为什么选择哺乳动物的血液来分离血红蛋白？必须这样选择吗？

9红细胞洗涤”环节的目的是？ 采集的血样为什么要加入柠檬酸钠？

采集的血样在离心的时候为什么是“低速短时”？ 洗涤时为什么用的是生理盐水而不是蒸馏水？

搅拌的时候为什么强调“缓慢”？ 为什么要强调多次洗涤？ 洗涤到什么情况才算干净？

10.“血红蛋白的释放”环节的目的是？ 在烧杯中加入蒸馏水和甲苯的目的是？ 搅拌的时候为什么强调“充分搅拌”？ 11.“分离血红蛋白溶液”步骤的原理是什么？

离心后溶液分为4层，从上到下分别是何种物质？各有什么样的表观特征？

过滤和分液漏斗分别发挥什么作用？

思考：如果高速离心后并未出现预期的分层现象，可能是什么原因？

12.粗分离利用的是什么技术？主要的目的是什么？为什么透析袋外面用的是磷酸缓冲液？如果在透析袋外面的缓冲溶液中加入双缩脲试剂或出现什么现象？

13．典型例题

如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题。

(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现 了蛋白质具有________功能。

(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________。 (3)甲装置用于________，目的是________________。

2