制备型薄层色谱的制备与分离

新的皂苷组分。Pyka[ 10 ]在硅胶60F254铝板上分别用正己烷2乙酸乙酯2乙酸和氯仿2正丁醇2乙酸2水二维展开分离了7种胆汁酸。Amanda综述了一维薄层和二维薄层的区别以及二维薄层应用的优点。 3 薄层色谱的实验步骤 3.1吸附剂的选择

薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶。

薄层色谱用的吸附剂和支持剂：薄层吸附色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶；分配色谱的支持剂为硅藻土和纤维素。

硅胶是无定形多孔性物质，略具酸性，适用于酸性物质的分离和分析。薄层色谱用的硅胶分为：“硅胶H”—不含粘合剂；“硅胶G”—含煅石膏粘合剂；“硅胶HF254”—含荧光物质，可用于波长为254nm紫外光下观察荧光；“硅胶GF254”—既含煅石膏又含荧光剂等类型。

与硅胶相似，氧化铝也因含粘合剂或含荧光剂而分为氧化铝G、氧化铝GF254及氧化铝HF254。

粘合剂除上述的煅石膏（半水合硫酸钙：2CaSO4·H2O）外，还可用淀粉、羧甲基纤维素钠。 1）、硅胶：

“硅胶H”—不含粘合剂； “硅胶G”—含煅石膏粘合剂；

其颗粒大小一般为260目以上。颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。

化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf值较小。

酸和碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 卤代物、醚 >烯 > 饱和烃

2、薄层板的制备（湿板的制备）

薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚度要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。在烧杯中放入2g硅胶G，加入5—6ml 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液，调成糊状。将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载

玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下晾干后进行活化。

通常将薄层板分为硬板（加粘合剂）和软板（不加粘合剂）

薄层吸附色谱和柱吸附色谱一样，化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf值较小。因此利用化合物极性的不同，用硅胶和氧化铝薄层色谱可将一些结构相近或順、反异构体分开。

薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚度（0.25—1mm）要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。

（1）平铺法：用薄层涂布器涂布，它适合于科研工作中数量较大要求较高的需要

（2）浸渍法：把两块干净的玻片叠合，浸入调制好的吸附剂浆料中，取出后分开、凉干。

（3）简易平铺法（倾注法）：将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下凉干后进行活化。 3.2 薄层板的活化

将涂布好的薄层板置于室温凉干后，放在烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105—110℃活化30min。氧化铝板在200℃烘4h可得到活性为Ⅱ级的薄板，在150—160℃烘4h可得活性为Ⅲ—Ⅳ级的薄板。氧化铝板与硅胶板的活性测定见 3.3 点样

通常将样品溶于低沸点溶剂（丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚和四氯化碳）配成1%的溶液，用内径小于1mm管口平整的毛细管点样：

（1）先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。

（2）若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。 （3）若在同一板上点几个样，样点间距离应为1—1.5cm。 （4）点样要轻，不可刺破薄层。

在薄层色谱中，样品的用量对物质的分离效果有很大影响，所需样品的量与显色剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。样品太少，斑点不清楚，难以观察，但样品量太多时往往出现斑点太大或拖尾现象，以至不易分开。 3.4 展开

薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。常用的展开槽有：长方形盒式和广口瓶式。展开方式有： （1）上升法 将色谱板垂直于盛有展开剂的容器中，适合于含粘合剂的色谱板。 （2）倾斜上行法 色谱板倾斜10—15°角；色谱板倾斜45—60°角，适用于含有粘合剂的色谱板。

（3）下降法，用滤纸 薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样，主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。凡溶剂的极性越大，则对一化合物的洗脱能力也越大，即Rf值也越大（如果样品在溶剂中有一定溶解度）。薄层色谱用的展开剂绝大多数是有机溶剂.

（4）双向色谱法 将样品点在方形薄层板的角上，先向一个方向展开，然后转动90°角的位置，再换另一种展开剂展开。适合于成分复杂的化合物分离。 影响展开的因素 A 相对湿度的影响

B 溶剂蒸汽的影响（a 展开室的饱和 b预吸附） C 温度的影响

D 展距的影响 与分离度仅正比与展距的平方根。

3.5 显色 A光学检出法

a自然光 （400~800nm） b 紫外光（254nm或365nm）

c 荧光 一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点（灵敏度高、专属性高） B 蒸汽显色法

多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物的性质，且灵敏度也很高，故是定位时常用的方法；后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但是制备薄层时要注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。 C 物理显色法

用紫外照射分离后的纸或薄层后，使化合物产生光加成，光分解、光氧化还原及光异构等光化学反应，导致物质结构发生某些变化，如形成荧光发射功能团。发生荧光增强或淬灭及荧光物质的激发或发射波长发生移动等现象，从而提高了分析的灵敏度和选择性。 D 试剂显色法

广泛应用的定位方法。用于纸色谱的显色剂一般都适用于薄层色谱，还有防腐剂的显色剂不适合用于纸色谱及含有有机黏合剂薄层的显色，又时喷显色剂后续加热，这也不是用于纸色谱。

显色方法a喷雾显色：显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在纸和薄层。 b 浸渍显色：挥去展开剂的薄层板，垂直的插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度和规定在显色剂中浸渍的时间。 3.6测定比移值

在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。 4. 结束

薄层色谱因其设备简单、操作方便、适用性广,可以快速给出可靠、准确的结果等特点,一直被很多分析工作者所关注,并被用于许多领域。随着新的固定相和高速发展的仪器技术的引入,薄层色谱已成为一种灵敏、高效的分离与分析方法。今后,薄层色谱法仍将是可供选择的经济、可靠、快速的重要分析方法之一,并会有更加广阔的应用前景。

参 考 文 献

1. 何华，倪坤仪等. 现代色谱分析.北京.化学工业出版社.2004

2. 叶振华，宋清，朱建华等. 工业色谱基础理论和应用.中国石化出版社1998

3.付若农等.色谱分析概论. 化学工业出版社.2003

4. 汪正范,杨树民,岳卫华. 色谱联用技术. 北京:化学工业出版社, 2001