凋亡细胞的诱导与形态观察

凋亡细胞的诱导与形态观察

实验目的

1. 熟悉普通光镜下凋亡细胞的形态变化 2. 了解一些诱导细胞凋亡的实验方法

实验原理

细胞凋亡(apoptosis)是细胞受到内、 外因子刺激后发生的由基因调控的生理性死亡行为 ,是一个主动和高度有序的过程。

细胞凋亡对生物体的生长发育有着重要的作用。近年来 ,它已成为生命科学的热点研究领域 ,并取得许多突破性进展。

细胞凋亡的研究最早始于对动物的研究。植物细胞由于覆有细胞壁 ,难于操作与检测。因此 ,凋亡研究相对起步较晚。现在许多研究证明 ,植物中也普遍存在凋亡现象 ,如植物正常生长发育过程(胚的发育 ,导管筛管的形成 ,根、 茎、 叶的发育等) ,对环境的胁迫反应 ,及被病原体侵入引起的超敏反应( hypersensitive response ,HR)中等。

实验用品

1.仪器和用具：普通光学显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、离心管。 2.材料：洋葱 3.试剂：（1）1mol/L Cacl2，2mol/L Cacl2，5mol/L Cacl2，8mol/L Cacl2，10mol/L Cacl2

(2)改良本分品红染色液：A液：取3.0g碱性品红溶于100ml 70%酒精中，此液可于4℃长期保存。B液：取A液10ml加入90ml 5%苯酚水溶液中（两周内使用）。C液：取B液55ml，加入6ml 冰醋酸和6ml 38%的甲醛（可长期使用）。

取C液10ml，加入90ml 45%醋酸和1.5g山梨醇。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。防止两周后使用，染色效果更好，可普遍用于植物组织的压片法和涂片法。使用2~3年不变质。

实验方法和步骤

（1） 处理液的准备：第一组：2ml去离子水。第二组：2ml去离子水+1ml 1mol/LCacl2。

第三组：2ml去离子水+1ml 2mol/L Cacl2。第四组：2ml去离子水+1ml 5mol/L Cacl2。第五组：2ml去离子水+1ml 8mol/L Cacl2。第六组:2ml去离子水+1ml 10mol/L Cacl2。撕取洋葱鳞茎内表皮若干，分别放入上面各组试管中，2h后取样。

（2） 取出洋葱内表皮，平铺在载玻片上，滴加1~2滴改良苯酚品红溶液，20min后，加

盖玻片，镜检，拍照。