化妆品儿茶酚胺类物质检测

化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检

测方法编制说明

1 任务来源

受国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司委托，根据食药监保化函[2012]71号《关于委托组织开展化妆品中肾上腺素等禁用物质或限用物质检测方法标准研究的函》和《化妆品中肾上腺素等禁用物质或限用物质检测方法标准研究》项目委托协议书的要求，开展化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法研究，建立化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素快速、准确、灵敏的色谱检测方法。

2 研究背景

肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素均属于儿茶酚胺类物质，它们都是由酪氨酸衍生而来的系列物。其中，肾上腺素和去甲肾上腺素是人体内天然存在的，异丙肾上腺素是一种人工合成的拟肾上腺素药物。儿茶酚胺同时兼有α和β肾上腺素能活性，主要作用是兴奋血管，使血管收缩，特别是小动脉和小静脉收缩，表现在皮肤和黏膜比较明显；同时能使心脏兴奋，心肌收缩力加强，心率加快。化妆品中添加一种或几种这类物质，能促进毛发生长，防止皮肤老化，有除皱、增加皮肤弹性、抑制皮脂腺过多分泌等作用。但长期不规范使用会影响中枢神经系统和心肾等主要脏器的血液循环，出现各系统缺血症状和功能损害。欧盟化妆品条例1223/2009/EC和我国《化妆品卫生规范》（2007版）中明确规定，化妆品中禁止使用肾上腺素、异丙肾上腺素和去甲肾上腺素及其盐类。

3 研究现状

目前对肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素的检测多限于对药物和组织提取液的分析[1-6]，采用的方法多是液相色谱串联紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器A或质谱检测器进行检测，其中对三种物质的同时检测少见报道。目前化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素检测的文献报道较少[7-8]，尚无标准方法，

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远不能满足实际监管的需要。因此，建立化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素的检测方法，对维护消费者的健康和权益，为政府部门加强化妆品质量监管提供技术支撑具有重要意义。

本研究建立了化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的高效液相色谱/荧光检测器的定量测定方法和液相色谱/串联质谱的定性确证方法。

肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的基本信息见表1。

表1 肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的基本信息

名称 肾上腺素 去甲肾上腺

素 异丙肾上腺

素

4 项目完成情况

根据食药监保化函[2012]71号《关于委托组织开展化妆品中肾上腺素等禁用物质或限用物质检测方法标准研究的函》和《化妆品中肾上腺素等禁用物质或限用物质检测方法标准研究》项目委托协议书的要求，建立了化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法，方法研究充分考虑了方法的灵敏性、准确性和实用性。对测定方法的特异性、线性及线性范围、检出限和定量下限、检出浓度和最低定量浓度、精密度、准确度、回收率和实验样品检测等内容分别进行实验研究。 具体情况如下：

（1）建立了膏霜类、凝胶类和水剂类化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法。本方法采用高效液相色谱/荧光检测器进行定量测定，采用液相色谱/串联质谱对阳性样品进行定性确证，本方法中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检出限为0.02mg/L，定量下限为0.05mg/L；取1g样品时的检出浓度为0.2?g/g，最低定量浓度为0.5?g/g，满足分析检测要求。

（2）本方法由北京市海淀区产品质量监督检验所研究并起草，参与验证的单位有中国检验检疫科学研究院、北京市产品质量监督检验所、广州市质量监督检测研

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英文 epinephrine

CAS号 51-43-4

分子式 分子量 C9H13NO3 183.21

结构式

norepinephrine

51-41-2

C8H11NO3 169.18

isoproterenol 7683-59-2 C11H17NO3 211.26

究院。本方法主要起草人为郭启雷、曹红、刘艳琴、杨红梅、王浩，参加起草人为史海良、赵丽、潘红艳。验证结果满足《化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范》相关要求。

5 方法概述 5.1 仪器

Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Agilent 6410A三重四极杆串联质谱（美国Agilent公司）；Milli-Q超纯水发生器（美国Milli-Q公司）；涡旋混合器GL-88B(其林贝尔仪器制造有限公司)；Anke GL-16G-II离心机(上海安亭科学仪器厂)。 5.2 试剂

肾上腺素（Epinephrine，C9H13NO3，CAS：51-43-4），去甲肾上腺素（Norepinephrine，C8H11NO3，CAS：51-41-2），异丙肾上腺素（Isoproterenol，C11H17NO3，CAS：7683-59-2），纯度大于98.0%。乙腈、甲酸为色谱纯，正己烷、磷酸、盐酸、磷酸二氢钾、氯化钠为分析纯。 5.3 方法 5.3.1 色谱条件

色谱柱：SCX柱，250mm×4.6mm（i.d.），5?m，或性能相当者； 流动相：乙腈+0.05mol/L磷酸盐缓冲液（3.10）=（5+95）； 流速：1.0mL/min； 进样量：50?L；

荧光检测器激发波长：280nm，发射波长：321nm。 5.3.2 液相色谱/串联质谱条件 5.3.2.1 液相色谱参考条件

色谱柱：C18色谱柱，2.1×150mm，3.5?m，或性能相当者； 流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液=（2+98）； 流速：0.2mL/min； 进样量：20?L。 5.3.2.2 质谱参考条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；

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扫描方式：正离子扫描； 监测方式：多反应监测（MRM）；

干燥气：氮气，温度350℃，流速10L/min； 雾化器：氮气，压力40psi； 毛细管电压：4000V；

定性离子对、定量离子对、保留时间及碰撞能量见表2：

表2 肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的保留时间和质谱参数 化合物 去甲肾上腺素 肾上腺素 异丙肾上腺素

保留时间

（min） 2.2 2.6 6.7

母离子 170.2 184.2 212.2

碎裂电压 （V）

50 50 60

子离子 152.2 107.2 166.2 107.2 194.2 152.2

碰撞能量 （eV）

0 20 4 20 5 15

5.3.3 校准曲线的制备

标准溶液（? =1000mg/L）：称取肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素0.05g（精确到0.0001g）于小烧杯中，分别用0.1mol/L盐酸水溶液超声溶解后转移至50mL容量瓶中，0.1mol/L盐酸水溶液定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液，4℃冰箱保存。

混合标准溶液（? =10mg/L）：分别量取1.00mL肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素标准溶液（? =1000mg/L）至100mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸水溶液定容，配制成10mg/L的混合标准储备溶液，4℃冰箱保存。

标准系列：用0.1mol/L盐酸水溶液稀释混合标准溶液，精密配制质量浓度为0.05mg/L，0.10mg/L，0.50mg/L，1.00mg/L，2.00mg/L，5.00mg/L，10.0mg/L的系列浓度标准工作溶液。

校准曲线的绘制：在设定色谱条件下，分别取50?L进行HPLC分析，并根据标准系列质量浓度和峰面积绘制校准曲线。图1为肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素标准溶液的色谱图。

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