蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析

作者：张婷婷 马磊

来源：《江苏农业科学》2014年第04期

摘要：为研究蜡样芽孢杆菌基因的转录调控特征，通过鸟枪法和蓝白斑筛选，获得57个蜡样芽孢杆菌启动子片段，并以β-半乳糖苷酶为报告基因，比较了这些启动子片段在大肠埃希菌中的转录活性。对转录活性较高的4个启动子克隆片断进行测序、序列比对、特征分析，发现这4个克隆序列具有启动子元件、核糖体结合序列特征，其中2个克隆序列在枯草芽孢杆菌也表现出活性，表明兼有蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌RNA聚合酶σ因子序列识别特征。

关键词：启动子；随机克隆；蜡样芽孢杆菌；枯草芽孢杆菌

中图分类号： Q933 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0025-03 收稿日期：2013-11-01

基金项目：国家自然科学基金（编号：31272416）；石河子大学高层次人才科研启动专项（编号：RCZX201137）；石河子大学优秀青年项目（编号：2012ZRKXYQ13）。

作者简介：张婷婷（1984—），女，新疆石河子人，硕士，讲师，主要从事微生物生态研究。E-mail：120978935@qq.com。

通信作者：马磊，博士，副教授，主要从事生物信息学与分子遗传研究。E-mail：mlei@shzu.edu.cn。蜡样芽孢杆菌属兼性厌氧微生物，可产生毒素引发呕吐、腹泻等肠胃疾病，严重威胁食品业[1]和饲养业。然而，蜡样芽孢杆菌也可分泌抗菌物质，抑制有害微生物生长，降解土壤中的营养成分，改良生态环境，其产生的细菌蛋白酶也可被用于麻脱胶、明胶液化、牛奶胨化、还原硝酸盐、水解淀粉等用途。虽然蜡样芽孢杆菌典型菌株

（ATCC14579）基因组已完成测序[2]，但目前对蜡样芽孢杆菌基因表达调控系统的研究较少，其内在丰富的遗传资源有待开发。本研究利用蜡样芽孢杆菌（ATCC14579）基因组文库资源分离、筛选了多个蜡样芽孢杆菌启动子序列，分析了其在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌中的转录活性及序列特征，旨在为构建高效表达系统奠定基础，也为多宿主比较研究提供途径。 1材料与方法 1.1材料