仪器分析实验讲义

2． 进入方法注释，填写方法所需的提示信息。 3． 点击“进样口”，选择中间进样口，类型“1079”，进样器柱箱“开”，制冷剂“关”，温

度设定为150?C（或所需温度），保持20分钟，其余参数为默认值，然后保存。 4． 点击“柱箱”，选择制冷剂“关”，温度设定为所需柱温，保持时间与进样口相同，其余

参数为默认值，然后保存。 5． 点击“检测器”，选择中间检测器，类型“FID”，检测器加热块“开”，电器“开”，温

度设定为150?C（或所需温度），其余参数为默认值，然后保存。 6． 点击“积分参数”，选择峰测量类型为峰面积，初始峰舍弃值设为“10000”，其它参数

为默认值，然后保存。

7． 保存建立的方法，文件命名时文件名只能用字母或数字。方法编辑完成。 四、 建立关机方法文件：

关机文件的编辑方式同（三、），但需将柱箱、进样口、检测器的温度设定为50?C，选择各部件为关闭状态。 五、 进入工作状态：

1． 点击“系统控制/自动化”图标，屏幕上出现“等待仪器模块”字样。

2． 打开色谱仪主机上的开关，系统自动进行初始化，初始化完毕后计算机屏幕上出现色谱

工作界面。点击“文件”，再点击“激活方法”，选择所需执行的文件，点击“打开”，色谱仪按文件所设定的实验条件自动操控。

3． 当工作界面上“Not ready”消失，所有红色标识由红色转变为绿色，出现“就绪”、“启

动”图标，仪器进入等待工作状态，即可准备进样。

4． 按实验要求吸取试样，进样。进样时，在注射测试溶液的同时，向下轻压注射器，使接

触片与下面的金属旋盖接触，此时，计时与进样同时进行，计算机开始按照文件编辑的方法条件自动记录色谱图。当测试的色谱峰全部流出、基线平直后，按“复位”图标，停止分析进程。点击“数据文件操作图标”（注意：图标上的“3800.*****.run”为数据文件号），在下拉菜单中点击“打开”，出现色谱图。点击“结果”，在下拉菜单中最下一行的子菜单中点击“查看标准报告”，出现标准报告，最大化窗口后记录或打印实验数据。

5． 屏幕上出现“就绪”，“启动”图标显现后，重复步骤4，进行下一次实验。 六、 关机程序：

1．激活关机文件，待色谱工作界面中柱箱、进样口、检测器的温度降至50℃时，关闭主机电源。

2．关闭色谱工作站界面。

3．顺序关闭氢气、空气和氮气钢瓶的减压阀和高压阀。 4．关闭计算机。实验完毕。

实验十四 高效液相色谱外标法测定碳酸饮料中苯甲酸

【实验目的】

（1）了解Agilent高效液相色谱仪的基本结构。 （2）了解高效液相层析定量分析的操作过程。

（3）了解Agilent高效液相色谱仪外标法测定苯甲酸的操作方法。 【实验原理】

苯甲酸是广泛使用的食品防腐剂之一，我国的食品添加剂使用卫生标准GB2760-1996

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中规定，在碳酸饮料中苯甲酸的最大使用量为0.2g / kg。反相高效液相色谱可用于各种食品中的苯甲酸分离检测，当流动相为甲醇：0.02mol/L乙酸铵（5%：95%）、检测波长230nm时，用标准物质的保留时间定性，可很快检测出测试溶液中的苯甲酸，以色谱峰面积的外标法能准确测定此种物质的含量。在用高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸时，必须先进行脱气，以避免将二氧化碳气体引入色谱柱干扰测定。

【主要仪器与试剂】 Agilent 1100高效液相色谱仪，Hypersil ODS-C18柱（5μm，4.6×100mm），UV检测器，50μl 微量注射器。超声波清洗器。

1.000g/mL苯甲酸（AR）标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加NaHCO3（20g/L）溶液5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶，用水定容。

苯甲酸标准溶液：取适量苯甲酸标准储备溶液于100mL容量瓶，用水定容。配制得浓度为75μg/mL、50μg/mL、25μg/mL的标准溶液系列。

样品测试溶液：市售碳酸饮料。 甲醇（色谱纯）。0.02mol/L乙酸铵（AR）溶液：称取1.26g乙酸铵溶于1000mL高纯水。重蒸馏水。

所有将在高效液相色谱仪上使用的测试溶液均须经滤膜（0.45μm）过滤。

色谱条件：柱温25℃；流动相：甲醇：0.02mol／L乙酸铵溶 液 = 5∶95；检测波长：230 nm； 流速：1.0 ml／min；进样量：10μL。

【实验步骤】

（1） 取市售碳酸饮料约10mL于50mL烧杯中，超声波脱气30min后，准确吸取

2.00ml，经滤膜（0.45μm）过滤滤入10mL比色管，以经滤膜（0.45μm）过滤的高纯水定容于10mL。

（2） 开机，打开色谱工作站。

（3）打开脱气阀，以5mL/min流速对流动相进行脱气。

（4）脱气完毕后，调节流动相流量为1.0mL/min，切换脱气阀，打开柱温控制开关，打开UV检测器开关。

（5）待基线平衡后，用苯甲酸标准溶液系列分别进样10μl，制备外标法校正曲线。操作方法见附一。

（6）进样10μl样品测试溶液，得到的色谱图由校正曲线确定样品中苯甲酸的含量。 （7）实验结束后，在傍路条件下，先后分别以水和甲醇冲洗进样口数次。

（8）在流动相流量为1.0mL/min的条件下，先以水清洗色谱柱20min，再以甲醇清洗色谱柱10min。

（9）关闭色谱工作站，关机。

附一 安捷伦高效液相色谱操作程序（校正曲线制作和样品测定）

1. 将手动进样阀放置至Load状态，微量注射器吸取所需量的溶液后插入手动进样阀的进

样口。

2. 切换手动进样阀，由Load状态改变为Inject状态进样。

3. 当实时色谱图中的色谱峰完全出现后，点击RunControl，在下拉菜单中点击Stop

Run/Inject/Sequence或直接点击F8键，结束一次进样的测定。查看色谱图。 4. 按1~3的步骤，注射浓度不同的标准溶液获得相应的色谱图。 5. 点击View，下拉后点击Data Analysis。

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6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15.

点击图标，将标准定量方法确定为外标法ESTD。 点击欲进行校正曲线制作所需色谱图的第一张图号。 点击Calibration，下拉后点击Add Peak。

在Default Amount框中输入相应的含量（浓度）后点击OK。 将不准备定量的信号峰浓度均改为0。

点击Calibration Table中的OK，从表格中删去这些峰信号。返回Calibration Table，进行待测峰确认。

在Calibration Table框中的Compound下方输入化合物的英文名称，在RT下方根据色谱图中的保留时间数据输入相应的值。

点击欲进行校正曲线制作所需色谱图的第二张图号。

点击Calibration，下拉后点击Add Level，在Default Amount框中输入相应的含量（浓度）后点击OK。

重复13.和14.的步骤，直到输入完成所需制作校正曲线的相应色谱图数据，完成多点校正曲线的制作。点击Calibration Table框中的OK，存储校正曲线数据。

按1~3的步骤，注射样品溶液，获得的色谱图由校正曲线自动给出相应成分的含量。 【思考题】

（1） 为什么流动相采用甲醇：0.02mol/L乙酸铵（5%：95%）？ （2） 为何要冲洗进样口？

实验十六 火焰原子吸收法测定钙片中钙含量

【实验目的】

（1）了解原子吸收分光光度计的主要结构及工作原理。

（2）掌握原子吸收分光光度计的操作方法及原子吸收分析方法。 （3）学会火焰原子吸收分析条件的选择。 【实验原理】

溶液中的钙离子在火焰温度下转变为基态钙原子蒸气，当钙空心阴极灯发射出波长为422.7 nm的钙特征谱线通过基态钙原子蒸气时，被基态钙原子吸收，在恒定的测试条件下，其吸光度与溶液中钙浓度成正比。 【主要仪器与试剂】

（1）仪器 SOLAAR M6MK2原子吸收分光光度计（附钙空心阴极灯），乙炔、空气供气系统，容量瓶（50 mL、100 mL），移液管，烧杯（50 mL）。 （2）试剂 盐酸（1：1）。 钙标准储备液（1000μg·mL-1）：准确称取光谱纯氧化钙（其量按所需浓度和体积计算）于烧杯中，加入盐酸 20 mL，低温加热溶解完全，转人1000 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。

钙标准溶液（100μg·mL-1）：将钙标准储备液用去离子水稀释10倍制得。 干扰抑制剂锶溶液（ 10 mg· mL-1）：称取六水合氯化锶 30.4 g溶于1000mL去离子水中。

样品溶液的制备：取钙片一片放入50 mL烧杯中，加少许去离子水润湿，用玻璃棒小心捣碎，加入1：1盐酸10 mL，低温加热溶解，加少量去离子水稀释，冷至室温，过滤，滤液收集于100 mL容量瓶中，分别用去离子水洗烧杯、滤纸各3～4次，洗涤液并入滤液，

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用去离子水稀释至刻度，摇匀。同时将1：1盐酸10 mL加入100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，配制样品空白溶液。 【实验步骤】 （1）干扰抑制剂锶溶液加入量的选择 在5个50 mL容量瓶中各加入钙标准溶液1.00 mL、1：1盐酸2.5 mL，分别加入10 mg·mL-1锶溶液1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0mL，以去离子水稀释至刻度。在选定的仪器工作条件下，以去离子水为参比调零，测定钙溶液的吸光度并作出吸光度-锶浓度关系曲线，从曲线上选择吸光度较大且稳定时的锶浓度作为测定时锶溶液加入量。

（2）标准曲线的溶液配制 在 6个50 mL容量瓶中，分别加入 100μg·mL-1钙标准溶液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL，加入选定量的锶溶液和1：1盐酸2.5 mL，以去离子水稀释至50 mL，摇匀。

（3）样品的测定 于3个50 mL容量瓶中，各加入2.00 mL样品溶液（视钙含量高低，加入样品溶液量可在0.50～5.00 mL范围内适当调整）、1：1盐酸2.5 mL和选定的锶溶液量，用去离子水稀释至刻度，摇匀。 （4）吸光度的测量 按附一的步骤，测量已配制好的溶液的吸光度及样品溶液的浓度。 【注意事项】

（1）乙炔为易燃气体，容易爆炸，使用时必须遵守操作规程（见实验室的安全）。 （2）雾化器和燃烧器是仪器的主要部件，应正确使用、保养。浓度过大的溶液不能直接吸喷。

【实验结果和讨论】

记录用标准溶液获得的标准曲线（线性回归方程和相关系数）；用仪器给出的样品溶液的钙含量（μg / mL），根据样品溶液取样量及测定溶液体积，计算出钙片中钙含量（m g·片-1）。

【思考题】

（1）根据钙元素性质，解释燃气及助燃气流量选择实验的结果。

（2）本实验中锶溶液的作用是什么？

（3）何谓空白溶液，为什么在制作标准曲线时空白溶液和测定样品时的测定空白溶液不完全一样？

（4）采用标准加入法时应注意什么？

（5）使用原子吸收分光光度计进行火焰原子吸收分析，应优化哪些参数？

附一 Solaar M6Mk2原子吸收分光光度计的操作使用

1． 打开光谱仪电源（热电的技术工程师已在安装时连接好光谱仪和计算机）、计算机电源，

进入WINDOWS桌面，双击WINDOWS桌面的SOLAAR图标，即出现SOLAAR-登录对话框。

2． 进入软件后，出现SOLAAR AA 系统操作界面，并会立即出现启动向导平台对话框。点

击关闭，关闭启动向导平台对话框，即出现SOLAAR AA 系统操作界面，所有的编辑、操作、应用都在该操作界面下展开和完成。进入SOLAAR AA系统操作界面，如数据工作站与光谱仪已通讯连接，即会在该操作界面的右下角出现ON-LINE，如果显示为OFF-LINE，拉下动作，在通讯中选连接，通讯连接完成后，即出现ON-LINE。 3． 点击系统操作界面中的

图标，进入灯的配置和状态对话框，将该灯的状态由关变为开，即点亮灯，并转入光路中。Ｍ系列如使用１号灯，则应在灯座位置选择4号（4号

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