01 生物化学实验--凯氏(Kjeldahl)微量定氮法测定血清蛋白质含量

（ 5 ） 将锥形瓶下移，使 M 管离开硼酸液面，再继续蒸馏 1 分钟，最后用蒸馏水 1ml 冲洗 M 管外壁，取下锥形瓶进行滴定。

（ 6 ） 蒸馏完后应立即清洗蒸馏器，其方法是先打开 P 2 ，将 A 室的水充至球形上方，然后塞住 G 口，放开 P l ， B 室内溶液即被吸出，然后再经 D 加蒸馏水入 B 室，如上所述吸出 B 室的水。如此反复洗涤 2 ～ 3 次。 （ 7 ） 空白管溶液也同样进行蒸馏。 三．滴定

用 0 . 01mol/L 的盐酸滴定锥形瓶中收集液，使其由蓝色变为灰紫色 ( 蒸馏前硼酸的颜色 ) ，即为终点，记录滴定所消耗盐酸的数量。 【计算】

1 ．

式中， A 表示滴定样品用 0 . 01mol ／ L 盐酸的 ml 数； B 表示滴定空白用 0 . 01mol ／ L 盐酸的 ml 数； 0.14 表示 1ml 0 . 01mol ／ L 盐酸 相当于 氮的毫克数。

2 ． 血清蛋白质含量（ g/L ） =

式中， NPN 表示 非蛋白氮 ， 即制备样品无蛋白滤液中的氮。 【注意事项】 一、样品消化注意事项

1 ．加入样品不要沾附在凯氏烧瓶瓶颈。

2 ．消化开始时不要用强火，要控制好热源，并注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下并促进其消化完全。

3 ．样品中若含脂肪或糖较多，在消化前应加入少量辛醇或液体石蜡或硅油作消泡剂，以防消化过程中产生大量泡沫。

4 ．消化完全后要冷至室温才能稀释或定容。所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。 二、蒸馏注意事项

1 ．进行蒸馏前必须熟悉仪器特点， P 1 打开 A 室水流出； P 2 打开 G 管水流入； P 3 打开漏斗 D 液体流入 B 室。蒸馏开始后， P 1 、 P 2 、 P 3 均需关闭，定氮处于密闭状态，切不可随意开启。

2 ．下列因素可导致 B 室液体压入 A 室，同时锥形瓶中的硼酸也可能倒吸入 B 室，导致定氮的失败。

（ 1 ） 蒸馏时 P 3 打开， B 室压力增高。

（ 2 ） 蒸馏时酒精灯移开，或火焰时断时续，时大时小， A 室遇冷，压力降低。

（ 3 ） 蒸馏时 P 2 打开，水至 G 管流入 A 室， A 室遇冷压力降低。 3 ．进行蒸馏前必须用水蒸气充分洗涤蒸馏器，以消除可能残存的氨。方法是于 M 管下放一盛有硼酸加指示剂的锥形瓶，若经蒸馏，锥形瓶内颜色不变，即证明蒸馏器内部已经洗涤干净，无氨残留。

4 ．实验室环境忌有碱性雾气，否则影响实验结果。

5 ．溴甲酚绿 - 甲基红指示剂的变色点为 pH5 . 1 ，大于 5 . 1 呈绿色，硼酸加指示剂应为灰紫色，若呈红色，说明硼酸酸性过强，可用 0 . 1mol ／ L 氢氧化钠调整。另外所用仪器不净也会出现红色。

6 ．本法极为灵敏，因此应避免外界氨的干扰，所用试剂及蒸馏水必须无氨。 7 ．一般在操作时，应先蒸馏空白管，然后再蒸馏样品管。 8 ．每次蒸馏完毕，应立即清洗蒸馏器，否则冷却后，清洗困难。 【思考题】

1 ． 消化是否完全与测定结果有何关系？ 2 ． 实验室的碱性雾气如何影响实验结果？