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2．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
① 保持正确的可读框 ；② 能够使其转录的启动子 ；③ 具有翻译的起始和终止信号 。 3．现有的基因克隆策略大体上分为四类： 功能克隆 、定位克隆 、表型克隆 、 电子克隆。 4．受体细胞的感受态是 接受外源DNA 的生理状态 。
5．DNA 重组连接的方法大致分为四种：① 黏性末端连接 ；② 平末端连接；③ 同聚物加尾连接 ；
④ 接头/连接子连接。
6．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个 基因组DNA 克隆，各种此类质粒的集合体
称之为构建了一个 基因组DNA 文库 。
7．将含有一个mRNA 的DNA 拷贝的克隆称作一个 cDNA 克隆 ，源于同一批RNA 制备物的克隆群
则构建了一个 cDNA 文库 。
8．在构建cDNA 克隆之前，可以用 差示杂交 来富集一特殊的核苷酸序列。做法是：用来自于能够产
生目的蛋白的细胞mRNA 分子同来自于另一类型细胞 (不产生这种蛋白质，但亲缘关系密切) 的过
量mRNA 分子杂交。
9．一旦克隆了一个遗传定位的基因，就可以用 染色体步移 技术来鉴定基因组DNA 文库中与之相邻 的基因克隆。
10．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用 聚合酶链式反应（PCR） 可以将这段DNA
进行百万倍的扩增。
11．SD 序列是mRNA 分子中同 核糖体RNA 结合的序列，其结构特征是AGGAGG 的全部或一部分。
12．环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链DNA 转化效率的 1% 。
13．cDNA 技术是进行真核生物基因克隆的一种通用方法，因为它可以用 mRNA 为模板，通过反转录
合成一个双链的、无 内含子 的基因，因而有利于在原核细胞中进行功能表达。
14．产生平末端的方法通常有：① 平切的酶 ；② S1 核酸酶切除黏性末端 ；③ DNA 聚合酶补平黏 末端 。
15．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 0℃ 时吸附DNA， 42℃ 时摄入DNA。
16．影响酶切的主要因素之一是底物DNA，底物的影响包括 DNA 的浓度 、DNA 的纯度、DNA 的二
／三级结构、识别位点和邻近的特异性序列 。
17．Sal I 是识别6 个核苷酸的酶，其识别切割的理论值是 4096 个碱基就有一个切点，但在哺乳动物
中，大约 300kb 才有一个切点。
18．在精简基因组文库中，用标记的 突变体DNA 同未标记的 野生型DNA 杂交，最后建成的是 缺
失部分的DNA 库。
19．构建基因组文库时连接方法主要是 粘性末端连接法；而构建cDNA 文库，可用 接尾连接法 或 人 工接头连接法。
20．将携带有外源基因并能持久传递给子代的动物称为 转基因动物，这些外源基因就叫做转移的基因。
21．为了提高重组DNA 分子对E. coli 的转化效率，通常可采取 CaCl2 处理和 42℃处理2min 。
22．含有多种限制性内切核酸酶识别序列的DNA 片段称为 多接头/MCS/多克隆位点 。 23．两个基因融合所编码的新蛋白称为 融合蛋白 。
二、选择题(单选或多选)
1．重叠群 (contig) 是一群克隆，在这个克隆群体中每个个体( A )。 A．相互之间部分重叠 B．都是来自不同生物的克隆
C．插入片段位于不同染色体的不同区段 D．位于同一染色体的不同区段
2．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等。在下列文库中 ( C ) 属cDNA 文库。
A．YAC 文库 B．MAC 文库 C．扣减文库 D．BAC 文库
3．下面关于多克隆位点 (Multiple Clone Site，MCS)的描述，不正确的一项是( A )。 A．仅位于质粒载体中 B．具有多种酶的识别序列
C．不同酶的识别序列可以有重叠 D．一般是人工合成后添加到载体中 4．部分填补是DNA 体外重组中常用的一种技巧，填补时应 ( C )。 A．控制DNA 聚合酶的用量 B．控制酶反应的时间 C．限制dNTP 的种类 D．注意只能填补载体
5．EcoR I 切割载体DNA 和供体DNA 所产生的片段在用于重组连接前要( B )。 A．用65℃处理5～10min 使限制性内切核酸酶失活 B．用CIP 处理载体DNA 防止自身环化
C．进行琼脂糖凝胶电泳检测 D．上述说法都正确 6．在cDNA 技术中，所形成的发夹环可用( C )。 A．限制性内切核酸酶切除 B．用3’切核酸酶切除 C. 用S1 核酸酶切除 D．用5’切核酸酶切除 7．在DNA 的酶切反应系统中，通常( ABC )。 A．用SSC 缓冲液 B．加入Mg2+作辅助因子
C．加BSA 等保护剂 D．上述说法中，有两项是正确的 8．黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( B )。 A．产生新切点 B．易于回收外源片段 C．载体不易环化 D．影响外源基因的表达
9．关于DNA 接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确? ( D ) A．给外源DNA 添加适当的切点 B．用于人工构建载体 C．调整外源基因的可读框 D．增加调控元件
10．DNA 的结构对转化的影响很大，一般说来，转化效率最高的是( A )。 A．完整的线性双链DNA B．单链线性DNA
C．完整的环状双链DNA D．开口的双链环状DNA
11．cDNA 文库包括该种生物的 ( A )。
A．某些蛋白质的结构基因 B．所有蛋白质的结构基因 C．所有结构基因 D．内含子和调控区
12．下列关于建立cDNA 文库的叙述中，哪一项是错误的？( A )
A．从特定组织或细胞中提取DNA 或RNA B．用反转录酶合成mRNA 的对应单链DNA C．以新合成的单链DNA 为模板合成双链DNA D．新合成的双链DNA 甲基化 13．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( C ) A．操作方便 B．易于回收片段
C．易于定向重组 D．载体易于自身环化，降低重组率
14．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确? ( C ) A．具有可诱导性 B．具有可转移性
C．细菌生长的任何时期都可以出现 D．不同细菌出现感受态的比例是不同的 15．以下哪些信息无法从cDNA 克隆中获得? ( B ) A．外显子序列 B．启动子序列
C．序列的相似性 D．编码产物的氨基酸序列 E．剪接的DNA 转录产物
16．从人基因组中分离、克隆一个基因所要面临的一个基本问题是：基因组大小有 ( D )碱基对，
而一个基因长度通常只有 ( D ) 碱基对。 A．几万亿，几百万 B．几万亿，几千 C．几十亿，几百万 D．几十亿，几千
三、判断题
1．外源基因 (或DNA 片段) 插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。错误，有可能 具有新功能
2．用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA，得到的黏性末端是不亲和
的黏性末端。错误，同裂酶也能产生黏末端
3．基因组DNA 文库是含有某一生物中全部DNA 序列随机克隆的克隆群，而cDNA 文库是含有某一
生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。错误，cDNA 文库只含有构建文库的细胞类型中表达的基
因，为某阶段、时期、组织中表达的基因
4．cDNA 克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。错误，无内含子
5．通过差示杂交后制备的cDNA 文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的概率大为提高。正确
6．在染色体步移中，可通过DNA 测序知道已到达所感兴趣的基因。错误，通过转基因实验鉴定
7．一旦有了一套已知顺序的基因组克隆，通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基因组区的所有克
隆，就可以进行染色体步移。正确，
8．根据遗传连锁作图把基因定位在基因组中是定位克隆的第一步，它为分离特定的人的基因提供了一
个直接而快速的方法。错误，需10-100 人做多年才能分离一个人的基因
9．人工感受态和自然感受态细胞都能吸收线性和环状单链DNA。错误，自然态不能吸收环状单链DNA
10．人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换。正确
11．线性DNA 片段被导入哺乳动物细胞后，在细胞内酶的作用下，很快相互连接成重复的DNA 大片
段，并能在随机位点整合到染色体中。正确
12．不匹配的黏性末端是不能通过黏性末端连接的。错误，可通过部分填充后得到黏末端 13．用限制性内切核酸酶切割载体DNA、供体DNA 后，要加入EDTA-SDS 终止液使限制性内切核酸
酶失活，这样有利于重组连接。错误，EDTA-SDS 终止液会抑制连接酶活性
14．限制性内切核酸酶Bgl H 识别的序列为A↓GATCT，BamH I 识别的序列为G↓GATCC，用它们分别
切割载体DNA 和供体DNA，不必使酶失活就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。正确，连接
后不再被两个连接酶识别
15．具有EcoR I 末端的外源DNA 片段可以以两个方向插入到EcoR I 末端的载体中。正确 16．不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。正确
17．低丰度的mRNA 不仅拷贝数少，而且种类也少。错误，种类多
18．同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。错误，不易回收
19．含有真核生物可诱导启动子和多克隆位点的自主复制的载体DNA 被称为表达载体。正确
四、问答题
1．怎样将一个平末端的DNA 片段插入到EcoR I 的限制位点中去？
答：可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为lObp 含有EcoR I 识别位点的短的DNA 片段，
然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoR I 切割这种连接片段，就会产生EcoR I 的单链末端。这
种片段就可以插入到任何EcoR I 的限制性核酸内切酶位点中。
2．构建基因组文库时为什么要对基因组DNA 进行部分酶切？（列举至少两条理由） 答：①部分酶切可获得长度适宜的片段（如获得中等长度的酶切片段）；②部分酶切可保证切出的
DNA 片段内部依然保留了部分限制酶位点，便于后续的克隆分析。
3．什么是基因组文库(genomic library)？它同遗传学上的基因库有什么不同?
答：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA 的各种片段的克隆群。
包括下列过程：高分子质量染色体DNA 的制备；体外重组连接；将重组DNA 导入寄主细
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