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察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。

（4）鉴定尿素分解菌的原理是分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，酚酞指示剂变红。

【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；掌握鉴定微生物分解菌的原理，能结合图中信息准确答题。

12.α抗胰蛋白酶可以治疗肺气肿等疾病。下图是科学家培育含人α抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的转基因山羊的流程图，请回答下列相关问题：

获取mAAT基因→构建基因表达载体→显微注射导入山羊受精卵→形成胚胎→将胚胎移入受体母羊→发育成转基因山羊

（1）利用PCR技术对mAAT基因进行扩增，前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为 模板合成的____。扩增过程中，该物质与DNA模板链的3’端结合，理由是____

（2）目的基因可以直接从生物体分离得到，也可以通过人工合成获取。请推测由mRNA反转录合成人α抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的大致过程：________________（用文字和箭头表述）。 （3）构建基因表达载体的目的是________。为了使mAAT基因只在山羊乳腺中表达，需要在构建表达载体时在mAAT基因前端加上在乳腺中特异性表达的____，同时还需要有标记基因，其作用是____

（4）胚胎移植中，应选择有____的个体作为受体母羊，并对受体母羊进行同期发情处理。 【答案】 (1). 引物 (2). DNA合成只能从3’端延伸 (3). mRNA

DNA、RNA

杂交双链→单链DNA人α抗胰蛋白酶因子基因（mAAT） (4). 使目的基因在受

体细胞中稳定存在并可遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用 (5). 启动子 (6). 将含有目的基因的细胞筛选出来 (7). 健康体质和正常繁殖能力 【解析】 【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入

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植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】（1）利用PCR技术对mAAT基因进行扩增，前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为模板合成的引物。由于DNA合成时只能从3’端延伸，因此扩增过程中，该物质应与DNA模板链的3'端结合。

（2）由mRNA反转录合成人α抗胰蛋白酶因子基因（mAAT）的大致过程：

。

（3）构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并可遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。启动子是转录过程中RNA聚合酶的识别位点，为了使mAAT基因只在山羊乳腺中表达，需要在构建表达载体时在mAAT基因前端加上在乳腺中特异性表达的启动子；标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来。

（4）胚胎移植中，应选择有健康体质和正常繁殖能力的个体作为受体母羊，并对受体母羊进行同期发情处理。

【点睛】本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题。

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