1如何真确采集和处理标本

1如何真确采集和处理标本？（标本采集的一般原则） ① 早期采集：采集时间最好是病程早期，急性期或症状典型时，且必须在使用抗菌药物之

前采集 ② 无菌采集：采集的标本应无外源性污染，严格进行无菌操作 ③ 根据目的菌的特性用不同的方法采集 ④ 采集适量标本：采集量不应过少，且要有代表性，注意在不同时间采集不同部位标本（肠

热症患者发病第一周采血液；第二周采集粪便；第三周采集尿液） ⑤ 安全采集：注意安全，防止传播和自身感染

标本处理：对环境敏感的细菌应保温并立即送检，其他采集后最好2小时内送到实验室，不能及时送检应置于一定环境中保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24小时。 2抗菌药物敏感试验的意义？ ① 可预测抗菌治疗的效果②指导抗菌药物的临床应用③发现或提示细菌耐药机制的存在，

帮助临床医生选择合适的药物④监测细菌耐药性，分析耐药菌的变形 3药敏试验K-B法的原理？

将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈，抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。 4影响药敏试验K-B法的因素？（注意事项） ① MH培养基（高温灭菌，厚度≥4mm，PH7.2-7.4,4℃保存）②抗菌药物纸片（纸片的指

控及保存）③菌液的浓度为0.5麦氏单位④试验操作质量⑤培养条件、温度及时间⑥⑥抑菌圈测量工具的精度⑦指控标准菌株是否合格⑧对不典型的结果必须重复试验来确定。

5临床微生物实验室室内质控？ ① 对微生物室检验人员的要求（扎实的理论基础，专业技能良好的职业道德）②操作手册

（实验室规章制度，质量控制方案）③仪器设备的功能监测（培养箱、冰箱、水浴箱、温度）④培养基的质量控制⑤试剂、染色剂及抗生素纸片的质量控制⑥检验标本的质量控制⑦标准菌株的来源和保存。 6简述肠杆菌科得共同生物学特性？ ① 形态染色相似，格兰阴性杆状或球杆状，无芽孢，多数有鞭毛，能运动，有致病性的菌

株多数有菌毛； ② 培养特性相同，为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在葡萄培养基和麦康凯培养基上生

长良好 ③ 主要生化特性：发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）触媒阳性，氧化酶阴性，可将硝酸盐还

原至亚硝酸盐，O／F试验为发酵型； ④ 抗原结构复杂：主要包括菌体（O）抗原、鞭毛抗原和表面抗原，O抗原、H抗原是肠

杆菌科血清分群、分型依据； ⑤ 抵抗力弱，对热及一般消毒剂敏感 ⑥ 易变异：S-R、R-S变异，耐药的变异。 7不发酵菌的耐药原因有哪些？ ① 细菌主动外排泵的存在②灭活抗菌药物酶类的产生③外膜蛋白的改变使抗生素进入细

菌的通道降低或缺如④生物膜的存在使抗菌药物不能进入细菌细胞内。 8厌氧菌感染的条件及临床特征？

条件①组织缺氧或氧化还原电势降低，见于血管损伤、组织水肿、烧伤②机体免疫功能下降

③一些慢性疾病导致免疫功能不足或受损，易并发厌氧菌感染。如糖尿病患者慢性肝炎④长期应用抗生素 特征：①感染局部产生气体，组织肿胀和坏死②感染部位多发生在黏膜附近③深部外伤的继发感染，流产、胃肠手术后发生的感染④分泌物有恶臭或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光⑤分泌物涂片镜检有细菌，而常规培养阴性者，或在培养基深部长的细菌⑥长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效病例。 9病毒感染的快速诊断方法有哪些？

㈠ 形态学检查：①电镜和免疫电镜检查②光学显微镜检查（查包涵体） ㈡ 病毒蛋白抗原检测：目前常用酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光测定（IFA）、

放射免疫测定（RIA）、蛋白质印迹（WB）试验检测病毒抗原，具有确诊意义 ㈢ 早期抗体检测：①IgM型特异抗体检测②免疫印迹试验

㈣ 检测病毒核酸：①核酸电泳②核酸杂交（斑点杂交、原位杂交、DNA印迹、杂交技

术）③聚合酶链反应（PCR）④基因芯片技术⑤基因测序

10葡萄球菌：临床上常以是否生长凝固酶将其分为凝固酶阳性（金黄色葡萄球菌）和凝固酶阴性球菌（皮肤黏膜） 葡萄球菌致病物质：①凝固酶②杀白细胞素③葡球菌溶血素④肠毒素⑤中毒性休克综合征毒素⑥表皮剥脱素（表皮溶解素）

生化特性：无鞭毛和芽孢，金葡细胞壁有葡萄球菌A蛋白具有抗原性，营养要求不高，35-37℃，PH7.4-7.6,金葡在血平板上有透明溶血环，10-15%NaCL中生长，抵抗力强，耐干燥，耐药性强，分解糖类和蛋白质，触酶试验阳性。

所致疾病：①化脓性疾病（局部：毛囊炎、疖痈；脏器：心内膜炎、腹膜炎；全身：败血症、脓毒症）②毒素性病：食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征③葡萄球菌性肠炎（伪膜性肠炎）

鉴定依据：①菌落直径6-8mm，光滑、完整、稍隆起、半透明、金黄色色素，出现或不出现透明溶血环②凝固酶试验阳性、玻片凝固酶试验：测定结合型凝固酶；试管法：测定分泌型凝固酶③耐热核酸酶试验阳性④甘露醇发酵试验阳性。

11抗菌药物作用机制：①β-内酰胺类干扰细菌细胞壁的合成，糖肽类阻碍细胞壁合成与β-内酰胺类作用部位不同。②与细菌核糖体亚基发生不可逆结合，抑制mRNA的转录和蛋白质的合成，氨基糖苷、四环素、30S小亚基、大环内脂、林可霉素、氯霉素、50S大亚基③氟喹诺酮抑制DNA解旋酶，使细菌DNA复制受阻，细胞死亡④磺胺类竞争与二氢叶酸合成酶结合抑制细菌生长。

12细菌耐药基质：主要有①产生一种或多种药物灭活酶，包括水解酶、钝化酶和修饰酶②抗生素作用靶位改变，包括PBP位点和NAA解旋酶的改变③细菌膜被膜的形成和通道蛋白丢失④细菌主动外排S过度表达。

13HBV抗原、抗体检测结果的临床分析

HbsAg 抗-HBs HbeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义

＋ － ＋ － － 潜伏期或急性乙肝早期

＋ － ＋ － ＋ 急性或慢性乙肝，传染性强（“大三阳”） ＋ － － ＋ ＋ 乙肝后期或慢性乙肝，复制水平低﹙小三阳）

－ ＋ － ＋ ＋ 乙肝康复，有免疫力 － ＋ － ＋ － 乙肝康复，有免疫力 ＋ － － － － HBV感染或无症状携带者

－ ＋ － － － 乙肝康复或接种过疫苗，有免疫力

－ － － － － 未感染过HBV，为易感者 14厌氧菌感染条件：机体免疫力低下，寄居部位改变，菌群失调，厌氧环境；

特征：感染组织局部产生大量气体；感染部位多发生在黏膜附近；深部外伤如枪伤后；分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染；长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；分泌物涂片经革蓝染色。

15肺炎链球菌鉴别：①毛尖状，尖端向外，成双排，无芽孢，荚膜肿胀和粘液层②血灰白（半）透明、表面光滑、菌落小，草绿溶血环、自溶酶、培养48小时后，出现“脐窝状”菌落。胆汁溶阳性，结核杆菌：杆菌肽敏感试验A群阳性，PYR试验B群阳性CAMP。 16什么是标准化操作程序？（SOP文件） ① 各级人员的职责和权限②实验室安全手册③标本采集和处理指南④培养基和试剂的配

置方法⑤本室开展的检验项目及最低鉴定要求⑥质量控制方案⑦常用参考数据。

17结合菌素试验：原理：有两种：一种为旧结核菌素（OT）另一种为纯蛋白衍生物（PPD）是用三氯醋酸沉淀结核菌培养滤液后的纯化物。没0.02ug为1U。注入皮内后如受试者已经感染结合，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发型超敏反应性炎症，若受试者为感染过结核则无反应。

结果分析：①阳性，注射部位硬结、红肿直径0.5-1.5cm之间，这表明机体曾感染过结核，出现超敏反应②强阳性，硬结直径大于1.5cm以上，表明可能有活动性结核，应进一步检查③阴性，注射部位有针眼大小的红点或稍有红肿，硬结直径小于0.5cm，说明无结核感染，但应考虑下述情况：如受试者处于原发感染的早期，或正患有其他传染病（如荨麻疹）、霍奇金病、结节病、艾滋病。

应用：①选择BCG接种对象及测定接种效果，结核菌素放羊阴性者应接种BCG②结核菌素试验对婴儿可做诊断结核病之用③可在未接种BCG的人群中作结核分支杆菌感染的流行病学调查④可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。 1最小抑菌浓度（MIC）：以 在试管内或小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为.... 2卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄的葡萄球菌仪器培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称为.....

3神奈川现象：从腹泻患者中分离到的副溶血性弧菌株95%以上在我妻琼脂上产生β溶血现象，称为....（KP）（我妻琼脂含高盐：7%，人O型血或兔血以及D-甘露醇）

4非O1群霍乱弧菌：O2群-O138群血清群可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称为.. 5线索细胞：BV患者可见大量阴道上皮细胞，少量脓细胞及武术成簇的小杆菌群集或吸附于上皮细胞表面，致使细胞边缘晦暗，呈锯齿形，即为... 6炭疽毒素：系由保护性抗原（PA），致死因子（LF）和水肿因子（EF）三种蛋白形成的毒素复合物，氮素皆无致病性。

7串珠试验：将待检菌接种于含青霉素0.05-0.5u／ml的培养基上，经37℃培养6小时候，炭疽杆菌无此现象。

8Ascoli试验：可作追溯性诊断，菌体多糖抗原耐热，耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应。（Ascoli热沉淀反应）

9BV：细菌性阴道病：是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧菌和GV为主的细菌所取代，同时伴有阴道分泌物性质改变的一组综合征，其病理表现以无炎症病变和WBC浸润为特点。 10卡介苗（BCG）：就是有毒力的牛型结合分支杆菌在甘油、胆汁和马铃薯的培养基中经 13年230次获得的减毒变异株，现已广泛用于人类结核病的防治。

11厌氧菌：是指一大群在有氧条件下不能生长，须在无氧条件下才能生长的细菌。 12“汹涌发酵”：产气荚膜梭菌在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使乳酪蛋白凝固，同时产酸大量气体（H2和CO2），将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，

甚至冲开管口棉塞，气势汹涌，称为....

13包涵体：指在易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡，由于发育时期不同，包涵体的形态和大小都有差别，成熟的包涵体含有大量的原体。

14二相性真菌：有些真菌可因环境条件（如营养、温度、氧气等）改变，可由一种形态转变为另一种形态，此真菌称为...如球孢子菌，组织胞浆菌、芽生菌和孢子丝菌等，这些真菌在体内或含动物蛋白的培养基上，37℃培养时呈酵母型，而在普通培养基上，25℃培养基时则呈霉菌型。

15Dane颗粒：是完整的乙型肝炎病毒颗粒，具有感染性，电镜下呈大球形颗粒，其结构由双层衣壳和核心组成，外壳为薄膜，表面膜上有HBAg，内壳为衣壳含有HbeAg和HbcAg ,核心为双链DNA聚合酶，在血清中检出表明病人体内HBV病毒复制活跃，此病人具有传染性。

16实验室生物安全（BSL）：描述防止实验室发生病原体或毒素意外暴露及释放的原则，技术及实践是指从事病原微生物活动的实验室中，避免病原微生物对工作人员和相关工作人员的危害，对环境的污染和对公众的伤害，保证实验研究的科学性，保护试验和试验因子免受污染。

17生物恐怖（bioterrism）：是指用致病性微生物或毒素等作为袭击手段，通过一定的途径散布危险因子，造成疾病的爆发、流行，导致人群失能和死亡。

18感染性废弃物：指丢失的感染性或潜在感染性物品，处理原则是在实验室内清除污染后丢弃，或经适当包裹运送到其他地方处理，对参与丢弃者不造成潜在危害，清除污染的方法有高压蒸汽灭菌（首选）焚烧等。 19医院感染（NI）：又称医院获得性感染（HAI）指在医院中获得的感染，分为外源性和内源性感染。

20微生物数码分类鉴定技术：集数字、电子、信息及自动分析技术于一体，采用标准化、商品化和配套化的生化反应试剂条（板），可将细菌鉴定到属和种，并可对不同来源的临床标本进行针对性鉴定。

21编码：即将所得生化反应模式转换成数学模式，可把某一菌的全部生化反应结果快速转录呈数字，经查阅检索本可将该数字（编码）转化成细菌名称。 22质量保证（QA）：是有计划、系统地评估和监测患者诊疗质量的整个过程，以便及时发现问题，采取有效措施，提高质量和服务，包括检验前，检验中、检验后。

1微生物按大小、结构、组成分为三大类：原核细胞型（无核膜、核仁、环状裸DNA结构，包括细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次体和衣原体），真核细胞型（有核膜、核仁、细胞器完整，包括真菌、原虫）非细胞型（最简单最小，仅有一种核酸类型，只能在活细胞内增生繁殖，包括病毒、亚病毒、朊粒）

2微生物与人类关系可分为三类：正常菌群、条件治病微生物、病原微生物 3常用的染色方法：革蓝染色、抗酸染色、荧光染色

特殊染色方法包括：鞭毛染色、异染颗粒染色、芽孢染色、荚膜染色、墨汁染色

4培养基种类：基础培养基（肉汤：广泛应用于细菌增菌）营养培养基（血琼脂平板、巧克力血平板）鉴别培养基（糖发酵管、KIA、MIU）选择培养基（加抑制剂、SS琼脂）特殊培养基（厌氧培养基和细菌L型培养基）

5WHO推荐为定性药敏试验的基本方法是：纸片扩散法（K-B法）CISI文件我国卫生部部颂文件

6烟民实验方法：体外抗菌药敏试验：①抑菌试验（定性→K-B法、半定量→稀释法、E试验）②杀菌试验③联合耐药实验④检测细菌产生的抗菌药物灭活E，体内抗菌药敏试验，药物浓度监测（自动仪器法）