微生物实验手册 - 图文

1、机械装置

（1）镜座：是显微镜的底座，支持整个镜体，使显微镜放置稳固。 （2）镜柱：镜座上面直立的短柱，支持镜体上部的各部分。

（3）镜臂：弯曲如臂，下连镜柱，上连镜筒，这取放镜体时手握的部位。镜臂的下端与镜柱连接处有一活动关节，可使镜体在一定范围内后倾，便于观察。 （4）镜筒：为显微镜上部圆形中空的长筒，其上端放置目镜，下端与物镜转换器相连，并使目镜和物镜的配合保持一定的距离，其作用是保护成象的光路与亮度。

（5）物镜转换器：接于镜筒下端的圆盘，可自由转动，盘上有3-4个螺旋圆孔，为安装物镜的部位，当旋动转换器时，物镜即可固定在使用的位置上，保证物镜与目镜的光线合轴。

25

（6）载物台：为放置玻片标本的平台，中央有一圆孔，以通过光线。两旁装有压片夹或移动器，可固定玻片标本和移动玻片。

（7）调节器：为了得到清晰的物像，必须调节物镜与标本之间的距离，使它与物镜的工作距离相等。这种操作叫调焦。在镜臂两侧有粗、细调焦螺旋各一对，旋转时可使镜筒上升或下降。大的一对是粗调焦螺旋，调动镜筒升降距离大，旋转一周可使镜筒移动2毫米左右。小的一对是细焦螺旋，调动镜筒的升降距离很小，旋转一周可使镜筒移动约0.1毫米。在用低倍物镜观察时，使用粗调焦螺旋；用高倍物镜观察时，用细调焦螺旋。

2、光学系统 （1）光源

（2）聚光器（或镜）：装在载物台下，由聚光镜（几个凸透镜）和虹彩光圈（可变光栏）等组成。它可将平行的光线汇集成束，集中在一点，以增强被检物件。聚光器可以上下调节，如用高倍镜时，视野范围小，则需上升聚光器，用低倍物镜时，视野范围大，可下降聚光器。

（3）光圈：装在聚光器内，位于载物台下方，拨动操纵杆，可使光圈扩大或缩小，借以调节通光量。 3、光学部分

（1）物镜：这是决定显微镜质量的最主要部件，安装在镜筒下端的物镜转换器上，一般有三个放大倍数不同的物镜，即低倍（10×）、高倍（40×）、油镜（100×）。使用油镜时，必须在盖玻片上和聚光器上滴加一滴香柏油（镜油），然后才能使用。

在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：

物镜 10× 40× 100× 镜口率（N.A.） 工作距离（mm） 0.25 0.65 1.30 7.0 0.65 0.15

（2）目镜：安装在镜筒上端，它的作用是将物镜所成的像进一步放大，使之便于观察。其上刻有5×、10×、16×等，表示不同放大倍数，可根据当时需要选择使用。目镜内的光栏上可装一段头发，在视野中则为一黑线，叫指针，可以用它指示要观察的部分。

显微镜的放大倍数和分辨率：

①放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数

②显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：D=λ/[2n·sinθ]。

式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离，?：可见光的波长（平均0.55?m)，

26

n：物镜和被检标本间介质的折射率，?：镜口角（即入射角）。

与其他物镜不同，油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油，原因有二： 1）增加照明亮度。

油镜的放大倍数可达100×，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。为了不使通过的光线有所损失，必须加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油。通常用香柏油（n=1.52）。

2）增加显微镜的分辨率，油镜的分辨率可达到0.2μm左右。

27

三、实验材料：

1、自制观察玻片； 2、香柏油、二甲苯等； 3、普通光学显微镜等。 四、实验步骤

（一）显微镜的使用操作 1、显微镜的安置； 2、光源调节；

3、调节双筒显微镜的目镜； 4、聚光器数值孔径的调节； 5、观察。

（二）显微镜观察的操作顺序 1、低倍镜观察

观察任何标本，都必须先用低倍镜，因为低倍镜的视野范围大，容易发现目标和确定观察的部位。

两眼从侧面注视物镜，并慢慢按顺时针方向转动粗调焦螺旋，使镜筒徐徐下必至物镜玻片约5毫米处，接着用左眼注视镜筒内，同是按反时针方向，向右、向内转动粗调焦螺旋使镜筒缓慢上升，直到看见清晰的物像为止（注意不可在调焦点时边观察边下必镜筒，否则会使物镜和玻片触碰，压碎破片，损坏物镜）。如一次调节看不到物像，应重新检查材料是否在光轴线上，重新移正材料，再重复上述操作过程直至物像出现和清晰为止。

为了使物像更加清晰，此时可使用细调焦螺旋，轻微转动到使物像最清楚时为止，但切忌连续转动多圈，以免损伤仪器的精确度。当细调焦螺旋向上或向下转不动时，就是转到了极限，千万不能再硬拧，而应重新调粗调焦螺旋，把物镜与标本的距离稍稍拉开后，再反拧细焦螺旋，约10圈左右（因一般可动范围为20圈）。

2、高倍镜观察

先用低倍镜找到要观察的物像，然后把物像移至视野中央，最后换用高倍镜，再调节细准焦螺旋对焦，调清物像，同时应调节光圈以增加通光量。

在换用高倍镜观察时，视野变小变暗，所以要重新调节视野的亮度，此时或升高聚光器或放大虹彩光圈。

3、油镜观察

（1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁； （2）调节光亮度；

（3）低倍镜观察：粗调、细调； （4）依次再进行中倍、高倍观察；

28