中科院生物化学与分子生物学研究生入学试题02

28. 泛素不属于热休克蛋白。

29. DNA甲基化永久关闭了某些基因的活性，这些基因在去甲基化后，仍不能表达。

30. 对靶蛋白的磷酸化是细胞内最重要、最普遍的酶活性调节方式。

四、 简答题 (每题 5 分，共 30 分)

1. 什么是反义RNA？真核生物中反义 RNA 调节基因表达的机理是什么？

2. 简述原核生物与真核生物 mRNA 的主要差别。 3. 设计 PCR 引物的主要原则是什么？

4. 以雌二醇为例，简述类固醇激素发挥作用的主要机制。

5. 核酸的紫外吸收有何特点？实验中如何利用这一特点研究核酸？ 6. 线粒体在真核生物的电子传递和氧化磷酸化中的作用是什么？

五、 问答题 (每题 10 分，共 50 分)

1. 真核生物蛋白质的翻译后加工有哪些？ 2. 酶的分离纯化主要过程及注意事项是什么？

3. 大肠杆菌乳糖操纵子的主要结构和阻遏蛋白的作用机制是什么？ 4. 请列举出 5 种真核生物中存在的RNA 并概括它们的功能。 5. 假设你需要将一段 cDNA 克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA 的两端和载体上均有 BamHI 的酶切位点，你需要用 BamHI 切割 cDNA 和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤： a. 用 BamHI 处理载体 DNA，然后用碱性磷酸酶去除5′ 端的磷酸基； b. 用 BamHI 处理 cDNA, 然后与步骤 a 中得到的载体 DNA混合，加入DNA聚合酶，在适当的条件下使 cDNA与载体连接；

c. 将步骤 b 的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。

因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。 你还参照实验手册做了下面四组对照：

对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的（即不含有载体的）

大肠杆菌感受态细胞 （cells alone）。 对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面（vectoralone）。

对照三、用BamHI酶切载体DNA后，不用碱性磷酸酶处理，不需要cDNA，直接加入 DNA聚合酶，然后转化、涂板 (Omit phosphatase, omit cDNA)。

对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同 (Omit cDNA)。 你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：

No. of Colonies

Preparation of

Sample 1 2 3 Control 1 Cells

alone TMTC 0 0 Control 2 Uncut

vector TMTC 0 >1000 Control 3 Omit phosphatase, omit cDNA TMTC 0 435 Control 4 Omit

cDNA TMTC 0 25 Experimental

sample TMTC 0 34

TMTC = too many to count

请回答下列问题：

A. 解释第一次实验失败的原因，并说明对照一的目的是什么； B. 解释第二次实验失败的原因，并说明对照二的目的是什么； C. 对照三和对照四的目的是什么？为什么实验手册上建议用碱性磷酸酶处理载体？