2012.9.17 DPPH清除自由基试验计划与报告（修改）

DPPH 自由基清除实验

1 试剂与仪器

DPPH的乙醇溶液，本科女生做的，0.04 mg/ml （应该冰箱保存，低温，避光） 糖膏：本科女生的一份，还有鲁小静的一份 紫外可见分光光度计三楼一台。四楼一台 2 实验方法

糖膏配置成为固定浓度溶液水溶液，按照2 ml：4 ml或者2 ml：2 ml混合，橱柜内黑暗室温放置30 min之后再316 nm左右波长测量吸光度。应该是516 nm

分别测量三个吸光度值（每组三个平行），可以根据文献中公式计算自由基清除率，另外根据不同浓度糖的吸光度或者不同浓度糖对于自由基的清除能力得到一条曲线。 糖溶液+DPPH 水/乙醇+DPPH 糖溶液+乙醇 3 现已经得到数据 3.1 女本科生做的 DPPH+糖mg/ml 溶液配比 ml DPPH+水 （应该为乙醇， 此处作为空白对照） 0.1 0.07 1 0.361 0.105 2 0.548 0.538 3 0.587 0.608 0.811 4 0.865 0.796

3.2 女本科生第二次数据 0.004 0.383 0.533 0.595 0.924 0.913 糖 1 2 2 2 2 DPPH 2 4 2 2 结论：没有趋势性，找不到问题，找不规律。 编号 1 2 3 4 5 6 DPPH（0.04 mg/ml）/名称 加入样品 溶剂 A 4 ml DPPH 水+DPPH对比参照 2 ml水 0.04 mg/ml 0.971 乙醇+DPPH对比参4 ml DPPH 照 2 ml乙醇 0.04 mg/ml 0.976 4 ml DPPH 糖溶液+乙醇 2 ml 2mg/ml 糖 0.04 mg/ml 0.039 2 mg/ml+DPPH 2 ml 2mg/ml 糖 4 ml 乙醇 0.938 4 ml DPPH 1 mg/ml+DPPH 2 ml 1 mg/ml 糖 0.04 mg/ml 0.955 2 ml 0.5 mg/ml 4 ml DPPH 0.5 mg/ml+DPPH 糖 0.04 mg/ml 0.976 结论：可能是糖溶液的浓度不够高，DPPH与糖反应后基本没有吸收

3.3 鲁小静师姐样品 糖 mg/ml DPPH mg/ml A 溶液状态 100 0.04 0.17 黄色，透明 10 0.04 0.509 正常透明 100 0.004 0.484 浅黄，有絮状沉淀 10 0.004 0.006 正常透明 空白 水 0.004 0.049 正常透明 空白 水 0.04 0.883 正常透明

结论：DPPH可能浓度偏大，与相应的DPPH相比，10 mg/ml浓度糖溶液与DPPH反应刚刚合适，按照网上公示计算，大概清除率为 48 %

4 试验计划 4.1 存在问题： DPPH浓度太高了，吸光度太高，需要降低DPPH浓度，或者是改变糖溶液与DPPH配比。 糖溶液的浓度需要重新调节。使之差不多能达到3.3中A=0.509的比例 10 mg/ml 糖溶液，吸光度A=0.509时溶液具体分析： 配置前 混合后理论浓度 DPPH 4 ml 0.04 mg/ml 6 ml 0.0266 mg/ml 糖 2 ml 10 mg/ml 3.33 mg/ml

4.2 试验计划

10mg/ml浓度的糖与DPPH混合得到吸光度大概0.509，相对应如果按照2 ml加入2 ml可能需要糖的浓度降低一倍。 计划：

对照 糖浓度 加入量 DPPH 加入量 mg/ml ml mg/ml ml A 10 2 0.04 2 5 2 0.04 2 2 水 0.04 2

每个浓度要测三组吸光度值，每组三个重复 A0:水（2mL）+DPPH（2mL） A1：糖（2mL）+DPPH（2mL） A2：糖（2mL）+水（2mL）